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钝齿棒杆菌SYPA5-5发酵产L-精氨酸的代谢工程改造     在线阅读 整本下载 分章下载 分页下载 本系统暂不支持迅雷或FlashGet等下载工具
【英文题名】 Metabolic Engineering of Corynebacterium Crenatum SYPA 5-5 for the L-arginine Production
【作者】 徐美娟;
【导师】 金坚;
【学位授予单位】 江南大学;
【学科专业名称】 发酵工程
【学位年度】 2012
【论文级别】 博士
【网络出版投稿人】 江南大学
【网络出版投稿时间】 2012-06-15
【关键词】 L-精氨酸; 钝齿棒杆菌; 代谢工程; 基因簇; ArgR阻遏蛋白; 反馈抑制; 定点突变; 代谢流量分析;
【英文关键词】 L-Arginine; Corynebacterium crenatum; Metabolic engineering; Gene cluster; ArgR repressor; Feedback inhibition; Site-directed mutagenisis; Metabolic flux analysis;
【中文摘要】 钝齿棒杆菌SYPA 5-5是本实验室筛选并经过多级诱变获得的一株高产L-精氨酸生产用菌株。目前,代谢工程育种已在棒杆菌菌种改良方面得到了广泛的研究和应用。本文对钝齿棒杆菌进行了一系列代谢工程改造以进一步提高其L-精氨酸产量,并对L-精氨酸的合成代谢途径及调控机理进行了研究,主要结果如下: (1)克隆了钝齿棒杆菌SYPA 5-5精氨酸合成关键酶基因簇argCH 9039,将其中的8个基因(编码7个酶和1个阻遏蛋白)分别在大肠杆菌中进行了克隆表达;并对7个酶的酶学性质进行了初步研究,为进一步发酵过程优化提供了理论依据;另外,将7个酶逐个在SYPA 5-5中增强表达,获得的SYPA 5-5-argC~argH等重组钝齿棒杆菌发酵L-精氨酸的产量均有所提高,其摇瓶产酸提高率为9.3%~23.0%;同时,将携带上游启动子的argCH 9039基因簇在钝齿棒杆菌中过量表达,获得的重组菌SYPA 5-5-9039摇瓶产酸可提高40.9%;在5 L发酵罐上发酵产L-精氨酸达45.9 g/L,产酸提高了26.5%。 (2)通过对三株钝齿棒杆菌的argR基因进行序列同源比对分析,发现钝齿棒杆菌SYPA 5-5经多...
【英文摘要】 Corynebacterium crenatum SYA 5 is an aerobic, Gram-positive, non-sporulating coryneform bacterium and the mutant C. crenatum strain SYPA 5-5 could produce more L-arginine than its WT strain SYA 5. Strategies for developing amino acid producers are now in transition towards systems metabolic engineering from random mutagenesis. Recently, several amino acid producers have been successfully developed by systems metabolic engineering. There are some efficient strategies and elevations to improve the L-arginine ...
【更新日期】 2012-06-29

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