本研究以黄河鲤为实验材料,选择220条10bp的随机引物、10对SSR引物及100条ISSR引物,利用RAPD-PCR、SSR-PCR及ISSR-PCR三种分子标记技术对黄河鲤基因组进行扫描,试图发现一些与黄河鲤性别相关的连锁标记。SSR结果显示,虽然在对其DNA池进行扫描的过程中,在1对引物的扩增谱带上发现了1条可能与性别连锁的疑似条带,但当利用这对引物在更多的个体中验证时,没有发现其性别特异性;而ISSR结果表明,在所有筛选出来的10条引物的扩增谱带上,未发现与性别连锁的疑似条带。
利用RAPD技术对黄河鲤雌、雄基因池进行扫描的结果表明,其中的5条随机引物的扩增谱带中有疑似性别特异条带的存在,利用这5条随机引物在个体中进行反复验证,只有随机引物S2107的扩增产物中存在一条稳定的雄性特异条带。经回收、克隆、测序后获得了一条大小为909bp的候选雄性特异条带,命名为Ccmf1。BLAST检索发现该片段与位于斑马鱼连锁群1的一段重复序列(DKEY-24 H 22)有一定的相似性。
此外,本研究还利用抑制性消减杂交技术,成功构建了黄河鲤鱼基因组DNA的消减文库,随机挑选150个克隆经巢式引物PC...
【英文摘要】
In this study, we identified a sex-specific DNA marker using randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) fingerprinting, simple sequence repeat(SSR) and inter-simple sequence repeat (ISSR) in Yellow River carps (C. carpio from the Yellow River). Two hundred twenty random primers for RAPD fingerprinting, ten primes for SSR and one hundred primes for ISSR were used in pooled DNA samples and individual DNA samples from male and female fish. The results of SSR-PCR showed one candidate band which were different be...
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