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耐热、高活性杂合内切葡聚糖酶基因的设计、表达及酶学性质研究     在线阅读 整本下载 分章下载 分页下载 本系统暂不支持迅雷或FlashGet等下载工具
【英文题名】 Design and Expression of Hybrid Gene Encoding Thermostable Endoglucanase with High Activity and Property of Hybrid Enzyme
【作者】 周烈;
【导师】 刘建新; 吴小锋;
【学位授予单位】 浙江大学;
【学科专业名称】 动物营养与饲料科学
【学位年度】 2010
【论文级别】 博士
【网络出版投稿人】 浙江大学
【网络出版投稿时间】 2010-08-16
【关键词】 内切葡聚糖酶; 热稳定性; 催化活性; 瘤胃真菌; 杂合基因; 酶学性质; 大肠杆菌; BmNPV/Bac-to-Bac表达系统; 家蚕蛹; 大鼠;
【英文关键词】 BmNPV/Bac-to-Bac expression system; Catalytic activity; Endoglucanase; Enzyme activity; Escherichia Coli; Hybrid gene; Rat; Rumen fungus; Silkworm pupa; Thermostability;
【中文摘要】 热稳定性差和催化活性低是当前饲用内切葡聚糖酶生产和应用的瓶颈。本研究着眼于提高酶活较高基因的耐热性,以瘤胃真菌(Piromyces rhizinflata 2301)和耐热丝状真菌总状共头霉(Syncephalastrum racemosum BCC 18080)为亲本,将瘤胃真菌内切葡聚糖酶的高活性片段和总状共头霉内切葡聚糖酶的耐热片段进行拼接,设计出一种新的杂合内切葡聚糖酶基因,合成全基因后用大肠杆菌和家蚕BmNPV/Bac-to-Bac两种表达系统生产既耐热又在生理温度下酶活高的杂合内切葡聚糖酶,系统研究比较了杂合内切葡聚糖酶及其亲本酶的酶学性质。 1.里氏木霉内切葡聚糖酶Ⅱ基因在BmNPV/Bac-to-Bac快速基因表达系统中的探索性表达 采用RT-PCR方法克隆了里氏木霉QM9414内切-β-葡聚糖酶Ⅱ基因的cDNA编码序列(egl2),利用家蚕BmNPV/Bac-to-Bac快速基因表达系统,在细菌转座子的作用下将EGII基因整合到家蚕核型多角体病毒(BmNPV)基因组中,从而产生重组病毒。利用该重组病毒感染家蚕BmN培养细胞以及家蚕五龄幼虫,推算得出每只幼虫能够...
【英文摘要】 The production and thermostability of endoglucanase are critical to its application in industry. In this study, a high-activity endoglucanase gene fragment from rumen fungus and a thermostabilizing domain from thermophilic fungus were ligated together using P. rhizinflata 2301 and S. racemosum BCC18080 as parents. Then the hybrid gene was expressed in E. coli and the silkworm pupae, respectively. The biochemical properties of the hybrid enzyme were assessed and a rat feeding trial was conducted to ev...
【更新日期】 2010-12-16

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