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菜青虫N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的性质研究     在线阅读　整本下载　分章下载　分页下载 本系统暂不支持迅雷或FlashGet等下载工具
【英文题名】 Studies on the Properties of N-Acetyl-β-D-glucosaminidase from Cabbage Butterfly (Pieris Rapae)
【作者】 石艳;
【导师】 陈清西;
【学位授予单位】 厦门大学;
【学科专业名称】 生物化学与分子生物学
【学位年度】 2006
【论文级别】 博士
【网络出版投稿人】 厦门大学
【网络出版投稿时间】 2007-05-25
【关键词】 菜青虫; N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶; 性质; 动力学;
【英文关键词】 β-N-Acetyl-D-glucosaminidase; Cabbage butterfly (Pieris rapae); Properties; Kinetics;
【中文摘要】 比较菜青虫不同部位及不同生长期的菜青虫N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC3.2.1.52)的比活力,发现五龄幼虫表皮来源的NAGase比活力最高。通过解剖获得五龄菜青虫表皮,用0.05 mol/L PBS含0.1 mol/L NaCl缓冲液(pH=6.8)抽提、硫酸铵分级分离获得粗酶,并进一步通过Sephadex G-200凝胶过滤柱层析和羟基磷灰石柱层析(CHT II柱)纯化获得比活力为8715 U/mg的聚丙烯酰胺凝胶电泳单一纯NAGase酶制剂。采用凝胶过滤柱层析法测定该酶的分子量约为106 kD。通过SDS- PAGE方法测定NAGase含两个异型亚基,分子量分别为59.5和57.2 kD。该酶不含寡糖。 以对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物,测得该酶在0.1 mol/L PBS缓冲液中催化水解底物pNP-NAG的最适pH为6.2,最适温度为42℃;在37℃、pH 6.2 PBS中,该酶催化pNP-NAG水解的米氏常数Km为0.326 mmol/L,反应的活化能为83.86 KJ/mol。该酶在45℃以下,...
【英文摘要】 A N-Acetyl-β-D-glucosaminidase (NAGase) was purified from the integument of cabbage butterfly (Pieris rapae) by extraction with 50 mmol/L of sodium phosphate buffer (PBS, pH 6.8) containing 0.1 M NaCl and ammonium sulfate fractionation, then chromatography on Sephadex G-200 and Econo-Pac CHT-Пcolumn. The purified enzyme was a single band on polyacrylamide gel electrophoresis and the specific activity was determined to be 8715 U/mg. The molecular weight of whole enzyme was measured to be 106.0 kD...
【更新日期】 2007-06-13

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