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耐高温木聚糖酶Xyn10A热稳定性及其机制研究  
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【英文题名】 The Thermostability and Its Thermostable Mechanism of Xylanase Xyn10A with High Temperatures Tolerance
【作者】 陈秀霞;
【导师】 王飞;
【学位授予单位】 南京林业大学;
【学科专业名称】 林产化学加工工程
【学位年度】 2017
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 南京林业大学
【网络出版投稿时间】 2018-01-03
【关键词】 嗜热木聚糖酶; Ca~(2 )结合区域; 热稳定性; 结构模拟; 定点突变;
【英文关键词】 thermophilic xylanase; Ca~(2 ) binding domain; thermostability; structure modeling; site-directed mutagenesis;
【中文摘要】 本论文研究了来源于极端嗜热菌Thermotoga thermarum DSM 5069的木聚糖酶Xyn10A的热稳定性,利用同源建模和定点突变技术确定木聚糖酶Xyn10A的Ca~(2+)结合区域,并尝试对Ca~(2+)结合区域定点突变研究获得稳定性能更佳的突变体;同时对木聚糖酶Xyn10A的催化结构域的关键氨基酸定点突变确定其催化残基。主要研究结果如下:(1)首先在质粒p ET-20b-xyn10A中插入T2A(具备切割功能的2A肽链)和e GFP(增强型绿色荧光蛋白)基因片段,构建重组质粒p ET-20b-xyn-T-E,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。菌液在诱导后表现出绿色荧光,且经SDS-PAGE检测发现在130 k Da附近仍有一条带。这一结果说明质粒p ET-20b-xyn10A能够正常表达且T2A基因片段在大肠杆菌中也具备自我切割的功能。(2)分别将木聚糖酶Xyn10A第600位谷氨酸(Glu)和第707位谷氨酸(Glu)突变成丙氨酸(Ala)并构建突变体E600A和E707A。对原始酶Xyn10A和突变木聚糖酶进行酶学性质研究。以榉木木聚糖为底物,原始酶Xyn10A的比酶活为100 ...
【英文摘要】 To investigate the thermostability and its thermostable mechanism of Xyn10A from Thermotoga thermarum DSM 5069,protein structure modeling and site-directed mutagenesis were carried out in this study to find out the domain involved in the Ca~(2+)binding in the Xyn10A.Then we tried to obtain mutants with better stability by mutating some amino acids of the Ca~(2+)binding domain.Furthermore,the catalytic residues were also confirmed by the site-directed mutagenesis of key amino acids in the catalytic domain of...
【更新日期】 2018-03-01

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