【英文题名】
The Catalytic Properties of Phaseolus Vulgaris Epoxide Hydrolase and Its Directed Modification
【作者】
叶慧华 ;
【导师】
邬敏辰 ;
【学位授予单位】
江南大学 ;
【学科专业名称】
药学
【学位年度】
2017
【论文级别】
硕士
【网络出版投稿人】
江南大学
【网络出版投稿时间】
2017-11-20
【关键词】
菜豆 ;
环氧化物水解酶 ;
对映归一性 ;
定向改造 ;
应用 ;
【英文关键词】
Phaseolus vulgaris ;
epoxide hydrolase ;
enantioconvergence ;
directed modification ;
application ;
【中文摘要】
环氧化物水解酶(EHs)能够催化外消旋环氧化物的水解动力学拆分或对映归一性水解,保留单一构型环氧化物或转化为手性邻二醇。对映归一性水解可实现底物的完全转化,获得具有高对映体纯度和理论产率为100%的手性邻二醇。酶促对映归一性水解可以通过单酶法、双酶法和化学酶法实现,其中单酶法途径最为理想,但是仅有少数酶对不同构型的对映体存在互补的区域选择性。为挖掘新型EH并探讨其对映归一性催化性质,本研究扩增了一种菜豆EH(Pv EH1)的编码基因pveh1,将其在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了表达。在此基础上,对该酶进行了对映归一性的定向改造和工艺应用的初步研究,主要研究成果如下:(1)通过RT-PCR技术扩增了Pv EH1的编码基因pveh1,其开放阅读框长963 bp,编码320个氨基酸。一级和三维结构分析表明,Pv EH1与其他EHs的最高同源性为85.7%,其催化三联体为Asp~(101)-His~(299)-Asp~(264),属于α/β水解酶超家族。利用Ni-NTA柱纯化Pv EH1,其表观分子量为35.7 k Da,比酶活力为2.30 U/mg。酶学性质分析表明,Pv EH1的最适反应温度和p H分别为3...
【英文摘要】
Epoxide hydrolases(EHs)can catalyze the kinetic resolution or enantioconvergent hydrolysis of epoxides,retaining epoxide enantiomers or convergently transforming into diols.The enantioconvergent hydrolysis can achieve completely-conversion of substrates,affording diols with high enantiopure and theoretical yield of 100%.There are three strategies for that processes:the mono-enzymatic,bi-enzymatic and chemo-enzymatic approaches.The enantioconvergent hydrolysis of epoxides by single EH is an ideal process,but...
【更新日期】
2018-01-01
【相同导师文献】
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