【英文题名】
Improving the Stability of Creatinase Based on Chemical and Molecular Modification
【作者】
高亚楠 ;
【导师】
王武 ;
【学位授予单位】
江南大学 ;
【学科专业名称】
生物化学与分子生物学
【学位年度】
2017
【论文级别】
硕士
【网络出版投稿人】
江南大学
【网络出版投稿时间】
2017-11-20
【关键词】
肌酸酶 ;
同源二聚体 ;
酶稳定性 ;
表面修饰 ;
亚基间二硫键 ;
【英文关键词】
creatinase ;
homodimer ;
enzyme stability ;
surface modification ;
intersub unit disulfide bond ;
【中文摘要】
肌酸酶(creatinase;EC 3.5.3.3;简称CRE)是一种水解酶,能催化其底物肌酸水解产生肌氨酸和尿素,是肌酐代谢中的关键酶。CRE是一种诊断用酶,主要用于检测血清和尿液中肌酐含量进而评价肾脏功能。本研究主要涉及CRE在E.coli中的异源表达,CRE的表面化学修饰,以及利用生物信息学软件分析CRE的结构,设计亚基间二硫键,以期高酶的稳定性。(1)优化cre基因序列,异源表达及酶学性质研究。对Pseudomonas putida来源的cre基因与表达宿主E.coli的密码子偏好性进行分析,发现两者使用频率存在明显差异,然后对cre基因进行密码子优化合成。优化后的cre基因在E.coli中获得了可溶性表达,质谱分析表明重组CRE是以同源二聚体形式存在,与出发菌株一致。CRE经纯化后进行酶学性质及PAGE分析,并确定Tm值。(2)利用多聚赖氨酸(poly-lysine)对双亚基CRE表面进行化学修饰,高了酶的p H稳定性。通过对CRE表面酸碱氨基酸分析,选择具有多个结合位点的长链poly-lysine为修饰剂,优化修饰条件后,获得稳定性高的修饰酶。与修饰前的CRE相比,修饰后酶的Tm值高了2.07℃;...
【英文摘要】
As one kind of hydrolases,creatinase(EC 3.5.3.3,CRE)catalyzes the hydrolysis of creatine into urea and creatine,therefore plays important role in the metabolism of creatinine.CRE can be used as a diagnostic enzyme to detect creatinine levels in human serum and urine.The enzyme from pseudomonas putida was stable only under tempareture lower than 40℃,which was not conducive to the industrial production of the CRE.In this study,the original cre sequence was taken from P.putida.The research works mainly involve...
【更新日期】
2018-01-17
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