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枯草芽孢杆菌芽孢表面展示载体的构建及卷曲乳杆菌S层蛋白在芽孢表面的展示  
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【英文题名】 Construction of Bacillus Subtilis Spore Surface Display Vectors and the Display of S-layer Protein of Lactobacillus Cripatus on Bacillus Subtilisspore
【作者】 杨亚威;
【导师】 龚月生;
【学位授予单位】 西北农林科技大学;
【学科专业名称】 动物营养与饲料科学
【学位年度】 2017
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 西北农林科技大学
【网络出版投稿时间】 2017-07-17
【关键词】 枯草芽孢杆菌; S层蛋白; 芽孢表面展示; 穿梭表达载体; 整合;
【英文关键词】 Bacillus subtilis; S-layer protein; surface display of spore; shuttle expression vector; integration;
【中文摘要】 乳酸杆菌S层蛋白已被证实在乳酸菌的粘附功能中起主要作用,枯草芽孢杆菌及其芽孢均对动物机体有益,但在动物肠道中停留时间短,因此通过在枯草芽孢杆菌芽孢表面展示S层蛋白可增强枯草芽孢杆菌对肠道上皮细胞的粘附能力从而延长在肠道中的停留时间,最大限度地发挥枯草芽孢杆菌的益生特性。枯草芽孢杆菌芽孢表面展示载体类型包括质粒型、单交叉同源重组和双交叉同源重组。比较常用的为双交叉同源重组,常用的整合位点为淀粉酶基因位点,但这种方法存在展示效率低的缺点。本试验分别构建了三种不同方式的表面展示载体,探索三种方式的优缺点,并尝试将卷曲乳杆菌S层蛋白通过三种不同方式展示在枯草芽孢杆菌芽孢的表面。试验内容与结果如下:1.引物退火生成多克隆位点片段,构建带有Pglv启动子和多克隆位点的穿梭表达载体pLLF-2,利用该载体在枯草芽孢杆菌中成功表达了绿色荧光蛋白和β-半乳糖苷酶,证明了穿梭表达载体构建成功并成功地表达外源蛋白。2.扩增芽孢衣壳蛋白编码基因cot B和cotZ,并在3'端引入连结肽,扩增绿色荧光蛋白基因分别与芽孢衣壳蛋白的3'端连接,通过相应的酶切位点插入穿梭表达载体pLLF-2中,构建质粒型表面展示载体pEYGJ52和pEYW...
【英文摘要】 It has been identified that S-layer protein of Lacticacid bacteria plays a major role in the adhesion function of Lacticacid bacteria.Bacillus subtilis and its spore are beneficial to animal organism,but they stay in intestinal tract shortly.It can make the probiotic of Bacillussubtilis bigger by the display of S-layer protein on the spore of Bacillus subtilisbecause it can prolong the time of Bacillus subtilis in intestinal tract.The styles of the display of heterologous protein on the spore include plasmi...
【更新日期】 2018-01-05

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导师:龚月生    导师单位:西北农林科技大学    学位授予单位:西北农林科技大学
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