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高温α-淀粉酶耐热嗜酸的分子改良及其高效表达的研究  
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【英文题名】 Improvement of The Thermal and Acidic Stability and Efficient Expression of The Alpha Amylase BLA
【作者】 王培立;
【导师】 姚斌;
【学位授予单位】 中国农业科学院;
【学科专业名称】 生物化学与分子生物学
【学位年度】 2016
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 中国农业科学院
【网络出版投稿时间】 2016-07-21
【关键词】 高温α-淀粉酶BLA; 大肠杆菌; 热稳定性; 酸稳定性; 可溶性表达;
【英文关键词】 BLA; E.coli; thermostability; acid stability; soluble expression;
【中文摘要】 α-淀粉酶是迄今为止应用最为广泛,研究较多的一种酶制剂。来源于地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因bla所表达的α-淀粉酶BLA已被商业化并得到广泛应用。但在实际应用过程中,BLA还具有一定的缺陷性,比如:(1)BLA的温度稳定性对某些生产工艺还是不能满足;(2)BLA的最适反应pH为6.0,在低p H中的反应效率低;(3)其表达量还有进一步提升的空间。因此开发稳定性更加优良表达量更高的α-淀粉酶是一项有意义的研究。本研究正是针对BLA的这些问题开展了相关研究工作。(1)通过对BLA的二级结构及蛋白序列进行分析,发现在其四个α-螺旋中有一般不出现在α-螺旋中的甘氨酸,分别是G81、G216、G268、G364,我们利用定点突变技术将α-螺旋中的甘氨酸突变成丙氨酸构建了四个突变体分别为G81A、G216A、G268A和G364A。对突变体及野生型BLA的热稳定性进行分析表明:突变体G81A、G216A和G268A的Tm值分别比野生型BLA提升了1.2oC,2.4oC和2.2oC。其中突变体G216A在70oC保温5 min后,突变体的酶活为未保温时酶活的37%,而野生型保温后的残余酶活为17%。(2)通过使用两个结构相似...
【英文摘要】 The amylase is one of the most wildely used enzymes. There are lots of studies that have been carried out on the amylase. The gene bla isolated from the strain Bacillus licheniformis, has been employed in lots of the commercial applications. But in the practical application, the enzyme BLA also has some defects. For example: ⑴Although the BLA can tolerate the relative high temperature, its thermostability is limited in many industrial processes;(2)The optimal pH of the BLA is about the 6.0. The enzyme did n...
【更新日期】 2017-01-16

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