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黑曲霉葡萄糖氧化酶基因在里氏木霉中的重组与表达  
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【英文题名】 Recombination and Expression of Glucose Oxidase Gene from A.Niger in Trichoderma Reesei
【作者】 厉雪琪;
【导师】 夏黎明;
【学位授予单位】 浙江大学;
【学科专业名称】 生物工程
【学位年度】 2016
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 浙江大学
【网络出版投稿时间】 2016-04-18
【关键词】 葡萄糖氧化酶; 里氏木霉; 基因重组; 分泌表达; 发酵优化; 酶学性质;
【英文关键词】 Glucose oxidase; Trichoderma reesei; Genetic recombination; Secreted expression; Fermentation optimization; Enzymatic properties;
【中文摘要】 葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase,简称GOD)能催化β-D-葡萄糖氧化产生葡萄糖酸和过氧化氢,具有去葡萄糖、除氧、抑菌、产葡萄糖酸等功效,广泛应用于食品、饲料、医药、纺织等各大领域。目前,工业上主要通过黑曲霉、青霉属菌株来生产葡萄糖氧化酶。它们产生的GOD主要分布于胞内、胞壁之中,纯化过程损失大,产率较低。丝状真菌里氏木霉具有蛋白表达量大、胞外分泌率高等优良特性,利用基因工程技术在里氏木霉中表达葡萄糖氧化酶是实现该酶高效率生产的有效途径。本文依据里氏木霉密码子偏好性对黑曲霉葡萄糖氧化酶基因进行密码子优化。将合成的GOD编码序列嵌入里氏木霉强启动子(含信号肽)Pcbhl-ss、终止子Tcbhl之间构成完整的表达盒,并与潮霉素B抗性标记一同构成最终表达载体pCB-GODo该质粒载体经农杆菌介导转化至里氏木霉细胞中进行表达,共得到45株阳性转化子。通过双层平板筛选法对里氏木霉转化子进行初筛,确定蓝色圈直径最大的4株转化子进行摇瓶复筛,获得性能优良的重组里氏木霉T.reesei ZU-G3。该菌株72h发酵液中的GOD酶活高达100.20U/mL。用SDS-PAGE检测重组里氏木霉发酵液可得到约80kDa...
【英文摘要】 Glucose Oxidase has the capability of catalyzing the oxidation of β-D-glucose to gluconic acid and hydrogen peroxide. Due to its efficiency in removal of glucose and oxygen, bacteriostasis and gluconic acid production etc., glucose oxidase has gained considerable commercial importance in the food, beverage, textile, pharmaceutical and other industries. So far, glucose oxidase is mainly produced by fermentation of Aspergillus niger and molds. However, GOD produced by these strains is mostly distributed in in...
【更新日期】 2016-05-12

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