目的:1.通过离体培养大鼠星形胶质细胞,观察P物质对星形胶质细胞的活化作用,包括细胞形态学观察和对IL-1β和IL-10释放量的检测。2.通过P物质作用于离体培养的星形胶质细胞,观察星形胶质细胞胞内Ca2+浓度的变化,探讨活化可能的机制。方法:1.取出生24 h以内的SD乳鼠原代培养星形胶质细胞。将培养的星形胶质细胞分为5组:(1)对照组,细胞孵育全培液;(2)全培液+P物质30 n M组;(3)全培液+P物质100 n M组;(4)全培液+P物质300 n M组;(5)全培液+P物质1000 n M组。各组细胞分别在孵育2 h、6 h、12 h、24 h后收集细胞上清液同时保留细胞,以便进行后续实验。2.采用免疫细胞荧光法鉴定GFAP阳性的星形胶质细胞,并观察P物质孵育后星形胶质细胞在各浓度以及各时间点的形态变化。3.采用ELISA的方法检测P物质孵育后星形胶质细胞在各浓度及各时间点释放IL-1β和IL-10的情况。4.利用比例高内涵成像系统的胞内钙离子成像技术观察P物质作用于星形胶质细胞后,其胞内Ca2+浓度的变化。结果:1.培养的星形胶质细胞的鉴定:经免疫细胞荧光法鉴定,培养的细胞为GFAP阳性的星形胶...
【英文摘要】
Objective:1.Explore the implication of substance P in activation of astrocytes in vitro,concerning on cellular morphological changes and the level of IL-1β and IL-10 released.2.Determine whether and how the concentration of intracellular calcium is affected after astrocytes are treated with substance P.Methods:1.Primary cultures of astrocytes were prepared from SD rats born in 0-1 day.Astrocytes harvested during the 10 th to 12 th day have been divided into 5 groups:(1)control group, incubated with complete...
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