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κ-卡拉胶酶基因克隆表达及酶法制备卡拉胶低聚糖工艺研究  
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【英文题名】 Gene Cloning and Heterologous Expression of κ-carrageenase and Its Use in Preparation of Carrageenan Oligosaccharides
【作者】 刘哲民;
【导师】 牟海津;
【学位授予单位】 中国海洋大学;
【学科专业名称】 水产品加工与贮藏工程
【学位年度】 2014
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 中国海洋大学
【网络出版投稿时间】 2014-10-08
【关键词】 Zobellia; sp.; ZM-2; κ-卡拉胶; cgkZ; 胞外分泌表达; 条件优化; 胶寡糖制备工艺;
【英文关键词】 Zobellia sp. ZM-2; κ-carrageenase; cgkZ; extracellular secretion; peocess optimization; oligosaccharides preparation technics;
【中文摘要】 κ-卡拉胶是存在于海洋红藻细胞壁中的一种结构性多糖,大量研究证实,κ-卡拉胶寡糖及其衍生物具有抗病毒、抗肿瘤、抗HIV、免疫调节等多种生理活性,具有较高的药用开发价值。毋庸置疑,酶解法具有特异性强、产物单一、反应条件温和等特点,因此,酶解法制备κ-卡拉胶寡糖是一种理想手段。但自然界分离得到的κ-卡拉胶酶产生菌酶产量较低无法满足生产需求。酶基因工程技术的发展为酶的定向改造提供了条件,拓展了酶的研究空间。本文采用基因工程技术对细菌来源的κ-卡拉胶酶基因进行异源分泌表达,以期实现酶产量的大幅提升,进一步拓宽酶的应用范围。研究结果如下: (1)经16s rDNA鉴定,野生的κ-卡拉胶酶产生菌属于Zobellia属并命名为Zobellia sp. ZM-2。应用Primer-Blast设计了三对引物FP1/RP1、 FP2/RP2、FP3/RP3扩增κ-卡拉胶酶基因,结果显示,采用引物对FP2/RP2可以扩增出单一的目的条带。所得κ-卡拉胶酶基因的ORF长度为1638bp,编码545aa,其中N-端的29aa为信号肽序列,基因所编码的氨基酸序列与现有序列的最大相似度为86%,可以确定为一种新的κ-卡拉胶酶基因,...
【英文摘要】 κ-Carrageenan is liner sulfated galactans extracted from the extracellular matrixof red marine algae. Sulfated oligosaccharides and their derivates prepared fromκ-carrageenan have diverse biological and physiological activities, includingantitumor, anti-HIV, immunoregulation, and viral inactivation activities. Thus,κ-carrageenan oligosaccharides show potential use in functional foods andpharmaceutical areas. Undoubtedly, degrading carrageen with a specific enzymecalled carrageenase, which features high subs...
【更新日期】 2015-01-15

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