【英文题名】
Cloning,Prokaryotic Expression and Primary Study on Physiology Function of TASSP1from Wheat
【作者】
陈颖 ;
【导师】
徐朗莱 ;
【学位授予单位】
南京农业大学 ;
【学科专业名称】
生物化学与分子生物学
【学位年度】
2012
【论文级别】
硕士
【网络出版投稿人】
南京农业大学
【网络出版投稿时间】
2013-07-30
【关键词】
枯草杆菌类蛋白酶 ;
原核表达 ;
小麦 ;
叶片衰老 ;
TaSSP1 ;
【英文关键词】
subtilisin protease ;
prokaryotice expression ;
wheat ;
leaves senescence ;
TaSSP1 ;
【中文摘要】
本实验室在研究小麦叶片衰老过程中蛋白水解酶同工酶的变化时,发现一种了性质较为稳定的蛋白酶。进而纯化了该蛋白酶,并通过质谱鉴定以及对所得数据在NCBI数据库中比对,结果显示其属于枯草杆菌类(subtilisin-like)丝氨酸型蛋白酶,因此命名为TaSSP1(Triticum aestivum Subtilisin-like Serine Protease1);随后,通过对该蛋白酶抗原性分析,以其mRNA序列设计兼并引物,克隆到了与该蛋白酶抗原性相关的718bp基因片段(Triticum aestivum Subtilisin-like Serine Protease1-fragment, TaSSPl-f)接着,在此基础上,成功地在大肠杆菌中表达了该基因片段的蛋白产物,并制得了该蛋白酶片段的抗血清.近期,通过RACE(rapid amplification of cDNA ends)方法,成功获得了该蛋白酶基因的全序列,该序列全长为2361bp。
本论文工作在上述研究基础上,首先,对去除信号肽的TaSSP1全基因序列以及其不同结构域的基因序列进行了原核表达,获得该蛋白酶的不同蛋白片段,然后通过活性分...
【英文摘要】
In our laboratory, found a quite stable endopeptidase isoenzyme related leaf senescence in wheat leaves. Then purified the protease and identified it by MS (mass spectrometry). A comparative data analysis of protein sequence in NCBI databases showed that the protease is a Subtilisin (subtilase-like) protease. We named it as TaSSP1(Triticum aestivum Subtilisin-like Serine Protease1). Furthermore, designed degenerate primers based on antigenic analysis and mRNA sequence of TaSSP1, which is related to the anti...
【更新日期】
2013-11-25
【相同导师文献】
导师：徐朗莱 导师单位：南京农业大学 学位授予单位：南京农业大学小麦TaSSP1基因的克隆、原核表达及生理功能初步鉴定 [D]. 南京农业大学,2012小麦叶片中与Rubisco大亚基降解相关的蛋白酶的生化特性、合成定位及分离纯化研究 [D]. 南京农业大学,2011小麦叶片枯草杆菌类蛋白酶TaSSP1基因片段的重组表达和纯化及其多克隆抗体的制备 [D]. 南京农业大学,2011检测腺苷脱氨酶活性和研究蛋白质间电子传递的电化学新方法 [D]. 南京农业大学,2009小麦根尖细胞中一种响应盐胁迫与细胞死亡相关的内肽酶及其生化特性研究 [D]. 南京农业大学,2009一种与小麦叶片衰老相关的丝氨酸型蛋白酶的纯化及其生化特性鉴定 [D]. 南京农业大学,2009果胶高效降解菌株的紫外诱变选育、生物特性及其生物脱胶应用研究 [D]. 南京农业大学,2011盐胁迫下不结球白菜幼苗叶片内肽酶同工酶变化及其生化特性研究 [D]. 南京农业大学,2008沙门氏菌草酰乙酸脱羧酶基因的克隆、表达和产物纯化及其生化特性的鉴定 [D]. 南京农业大学,2009暗诱导衰老小麦叶片内一种耐热蛋白水解酶的分离纯化及其生化特性鉴定 [D]. 南京农业大学,2007
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