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人载脂蛋白O融合蛋白的构建与表达  
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【英文题名】 Construction and Expression of Recombinant Fusion Protein of Human Apolipoprotein O
【作者】 吴陈璐;
【导师】 赵水平;
【学位授予单位】 中南大学;
【学科专业名称】 内科学
【学位年度】 2011
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 中南大学
【网络出版投稿时间】 2011-10-17
【关键词】 载脂蛋白O; 基因克隆; 融合蛋白; 蛋白纯化;
【英文关键词】 apolipoprotein O; gene cloning; fusion protein; protein purification;
【中文摘要】 目的 构建人载脂蛋白O (Apolipoprotein O, ApoO)表达质粒,采用大肠杆菌原核表达系统制备重组抗原apoO融合蛋白并将其纯化,获得浓度高、纯度好的重组apoO。 方法 以人类肝脏cDNA文库为模板,聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)法扩增apoO DNA;将目的基因片段插入质粒pET-32a(+)相应位点构建重组质粒并转化大肠杆菌E.coli DH10B进行克隆,挑选阳性菌落进行基因测序;以测序正确的质粒转化大肠杆菌E.coli BL21 (DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导蛋白的表达;以Ni-NTA亲和层析法纯化大肠杆菌表达的apoO融合蛋白;通过十烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳法鉴定表达的目的蛋白的正确性;并以BCA检测法测定合成的apoO重组蛋白的浓度。 结果 1.PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳证实在SDS-PAGE上出现一条约519 bp大小的基因片段,符合预期结果。 2.成功...
【英文摘要】 Objectives To construct human apolipoprotein O (apoO) expression vector and obtain recombinant fusion protein thioredoxin (trx)-apoO by Escherichia coli prokaryotic expression system. Methods The ApoO gene fragment from the human liver cDNA library was amplified by PCR. The resulting product was inserted into pET-32a vector, cloned into plasmid E. coli DH10B and sequenced after double digestion. The confirmed cDNA then transformed into E. coli BL 21 (DE3) where it was induced to express protein ...
【更新日期】 2011-12-01

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