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分子突变改善扩展青霉脂肪酶的耐热性  
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【英文题名】 Improving Thermostability of the Penicillum Expansum Lipase by Molecular Mutagenesis
【作者】 沈麟;
【导师】 林琳;
【学位授予单位】 福建师范大学;
【学科专业名称】 微生物学
【学位年度】 2009
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 福建师范大学
【网络出版投稿时间】 2011-05-05
【关键词】 扩展青霉脂肪酶; 叠加突变; 热稳定性;
【英文关键词】 Penicillium expansum lipase; double-mutant; thermostability;
【中文摘要】 扩展青霉脂肪酶(PEL)可在油水界面催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油,是工业生产上一种重要的水解酶。本研究利用叠加突变技术手段,对扩展青霉脂肪酶(Penicillium expansum lipase, PEL)进行热稳定性的蛋白质工程改造。ep8是由本课题组前期获得的含有一个突变点的扩展青霉脂肪酶随机突变体,其热稳定性比野生型有所提高。作者以ep8为模板,利用重叠延伸PCR构建了pPIC3.5K-ep8-K56R、pPIC3.5K-ep8-P90D、pPIC3.5K-ep8-E207P、pPIC3.5K-ep8-E221P、pPIC3.5K-ep8-K226A、pPIC3.5K-ep8-P82D、pPIC3.5K-ep8-E113P、pPIC3.5K-ep8-I164S、pPIC3.5K-ep8-K115P、pPIC3.5K-ep8-S139R、pPIC3.5K-ep8-N157Y、pPIC3.5K-ep8-K56R-K115R等突变基因表达载体。将这些携带突变基因的表达质粒转化入毕赤酵母GS115,获得了12种含有突变基因的脂肪酶基因工程菌:PEL-ep8-K56R-GS、PEL-ep8-P90D-GS、...
【英文摘要】 Penicillium expansum lipase (PEL) plays an important role in commercial production for its catalyze hydrolysis function. In order to improving the thermostability of the PEL, the lipase encoding gene was mutated by site-directed mutagenesis. Several recombinant vetors which contain double or triple mutant genes were constructed by overlap extension PCR using the cDNA of a random-mutant lipase ep8 (a single site mutant) as the template and two special primers were used to generate mutation site. The recombin...
【更新日期】 2011-11-04

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