【英文题名】
Enhancement of Recombinant Cholesterol Oxidase Expression by Fermentation Optimization
【作者】
李闯 ;
【导师】
王武 ;
【学位授予单位】
江南大学 ;
【学科专业名称】
发酵工程
【学位年度】
2010
【论文级别】
硕士
【网络出版投稿人】
江南大学
【网络出版投稿时间】
2011-05-10
【关键词】
胆固醇氧化酶 ;
重组大肠杆菌 ;
乳糖诱导发酵 ;
双程培养策略 ;
恒pH-stat ;
可溶表达 ;
【英文关键词】
Cholesterol oxidase ;
Recombinant Escherichia coli ;
Lactose induced Fermentation ;
Two-phase culture ;
pH-stat ;
soluble expression ;
【中文摘要】
胆固醇氧化酶是一种重要的检测用酶,除广泛应用于医疗检测外,在食品开发、医疗保健、生物农药等方面也有应用潜力。鉴于微生物来源的胆固醇氧化酶表达量小且需要胆固醇诱导的问题,本实验室成功构建了一株可胞内表达胆固醇氧化酶的基因工程菌,但是胆固醇氧化酶主要以包涵体的形式存在,活性胆固醇氧化酶表达量低。本文采取调整诱导剂,优化发酵工艺等手段提高活性胆固醇氧化酶产率,建立一系列胆固醇氧化酶高效表达技术,有助于实现胆固醇氧化酶高效低成本制备。
本文以一株胞内表达胆固醇氧化酶的工程菌E. coli BL21(DE3)-PET28a-COD为生产菌株,以减少包涵体形成,提高活性胆固醇氧化酶产率为目标,采用外因优化与内因优化相结合的策略对胆固醇氧化酶发酵过程进行优化。
1.采用乳糖诱导胆固醇氧化酶表达,提高了胆固醇氧化酶可溶表达的比例,并优化了乳糖诱导胆固醇氧化酶表达的条件。采用乳糖诱导胆固醇氧化酶表达,酶活分别为0.76U/mL,0.45U/mg;是IPTG诱导时的4.0和2.4倍,显著提高了活性胆固醇氧化酶的表达水平。在优化后的诱导条件下诱导胆固醇氧化酶表达,酶活达到5.8U/mL,为初始条件的7.6倍。
...
【英文摘要】
As an important enzyme, Cholesterol oxidase was widely used in medical testing, on the other side, Cholesterol oxidase also had prospect in food processing, health care, bio-pesticides, etc. With the problems that low cholesterol oxidase production and needing cholesterol as inducer when cholesterol oxidase product by natural microbial, an engineering strain, expressed cholesterol oxidase intracellular, was successfully constructed in the laboratory. However, cholesterol oxidase mainly expressed in the form...
【更新日期】
2011-07-20
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