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产DCase的基因工程菌发酵及酶固定化工艺研究  
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【英文题名】 Study on the Fermentation Technology of the Gene Engineering Strain Producing NcarbamylDanimoacidamidohydrolase and Immobilization
【作者】 张小飞;
【导师】 刘友全;
【学位授予单位】 中南林业科技大学;
【学科专业名称】 林木遗传育种
【学位年度】 2006
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 中南林业科技大学
【网络出版投稿时间】 2006-11-09
【关键词】 D-对羟基苯甘氨酸; DCase; NC-D-pHPG; DHase; 发酵优化; 固定化;
【英文关键词】 D-hydroxyphenylglycine; NcarbamylDanimoacidamidohydrolase; N-Carbamoyl-D-P-hydroxyphenyldantoin; Dhydantoinase; ferment optimization; immobilization;
【中文摘要】 D-对羟基苯甘氨酸(D-pHPG)是半合成青霉素和头孢霉素的重要前体,是目前制药行业竞争激烈的产品之一,化学法制备D-pHPG带来严重的污染和毒害,现在酶法制备得到人们的青睐。酶法是利用D-海因酶(DHase)将苯海因(DL-pHPH)转化为N-氨甲酰基-D-对羟基苯甘氨酸(NC-D-pHPG),N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶(DCase)则继续将NC-D-pHPG转化为D-pHPG。但现有的菌种产酶活力不高,故提高酶活力和采取新技术提高酶利用率有着重要研究价值。 本实验菌种spMF0507是产DHase和DCase的野生菌,而DHase活力远远大于DCase,因此可以通过控制适当pH值,使DCase失活,而保留DHase活力生产NC-D-pHPG。此外还有一菌种Espf7是克隆了DCase基因的大肠杆菌,它能表达DCase活性继续将NC-D-pHPG转化为D-pHPG,可DCase是胞内酶,故需要对其进行细胞破碎才能释放出酶。另外利用正交法对spMF0507的培养基组成和发酵培养条件也进行了研究,之后把发酵优化结果投入5升发酵罐进行验证。最后对工程菌Espf7发酵后提取的...
【英文摘要】 D-hydroxyphenylglycine(D-pHPG) was the most important precursor used for the synthesis of Semisynthetic penicillin and cephalospor and was a produce competed furiously in the field of pharmacy.Making D-pHPG,enzyme method was better than chemical method which was poisonous.In enzyme method, P-hydroxyphenyldantoin (p-HPH) was transformed into N-Carbamoyl-D-P-hydroxyphenyldantoin(NC-D-pHPG) by Dhydantoinase(DHase), then NC-D-pHPG was transformed into D-pHPG by Ncarbamyl Danimo-acidamidohydrolase (DCase). But n...
【更新日期】 2006-12-16

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