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布鲁氏菌荧光定量PCR快速检测方法的建立及检测试剂盒的组装  
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【英文题名】 Establishment of Real-Time Fluorescence Quantitative PCR for Rapid Detecting Brucella and Assemblage of the Test Kit
【作者】 李光辉;
【导师】 王兴龙;
【学位授予单位】 吉林大学;
【学科专业名称】 预防兽医学
【学位年度】 2006
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 吉林大学；李光辉
【网络出版投稿时间】 2006-08-04
【关键词】 布鲁氏菌; 实时荧光定量; PCR; 检测; 试剂盒;
【英文关键词】 brucella; detection real-time fluorescence quantitative; PCR; kit;
【中文摘要】 本研究以布鲁氏菌(Brucella)基因组编码31kDa核周质蛋白的BCSP31基因设计了布鲁氏菌属荧光定量PCR特异性引物和Taqman荧光探针,优化了荧光定量PCR反应体系和条件,建立了布鲁氏菌属荧光定量PCR检测方法,组装了布鲁氏菌属检测试剂盒。采用该方法和检测试剂盒可检测所有布鲁氏菌,包括相应的种和生物型。在建立布鲁氏菌属荧光定量PCR检测方法的基础上,根据布鲁氏菌基因组多拷贝插入元件IS711及其下游多态位点,设计了检测牛、羊、猪种布鲁氏菌的引物和牛、羊、猪种特异性荧光探针,优化了牛、羊、猪种布鲁氏菌荧光定量PCR反应体系和条件,建立了牛、羊、猪种布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法,组装了牛、羊、猪种布鲁氏菌检测试剂盒,该方法能特异检测上述3个种的布鲁氏菌。上述荧光定量PCR方法和检测试剂盒能对15～75fg的布鲁氏菌基因组DNA进行检测。具有高度敏感性和特异性,同时采用本研究建立的检测方法对模拟样本和全血样本进行了检测,证明本方法可用于污染样和临床样本的检测。
【英文摘要】 Brucella are gram-negative bacteria that are pathogenic for humans and a varietyof livestock animals and wildlife. The genus Brucella has six recognized species onthe basis of host specificity : B.abortus , B.melitensis, B.suis, B.canis, B.ovis,B.neotomae. The six species have been subdivided into 19 biovar based on culture andbiochemical characteristics. The greatest economic impact result from bovinebrucellosis caused by B.abortus. Infection decreases reproductive efficiency mainly byabortion. B.abortus c...
【更新日期】 2006-09-13

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导师：王兴龙    导师单位：军事医学科学院军事兽医研究所    学位授予单位：吉林大学
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