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重组人源性抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌中的表达、纯化与活性鉴定  
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【作者】 严兴;
【导师】 姚汝华;
【学位授予单位】 华南理工大学;
【学科专业名称】 发酵工程
【学位年度】 2002
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 严兴
【网络出版投稿时间】 2005-09-01
【关键词】 单链抗体; 乙型肝炎表面抗原; 包涵体; 蛋白质纯化; 蛋白质复性;
【英文关键词】 single-chain antibody; HBsAg; inclusion body; protein purification; refolding of protein;
【中文摘要】 乙型肝炎是一种世界范围的流行性传染病,但目前还没有有效的治疗手段,因此预防是防治乙型肝炎的重点。血源性抗乙肝表面抗原抗体可用于乙型肝炎的被动免疫,防止乙型肝炎的母婴垂直传播。但是,血源性抗体的来源有限且具有潜在的传染性,给它的应用带来限制。开发重组人源性抗HBsAg抗体,可以实现抗体的工程化大规模生产,而且使用安全,可以弥补血源性抗体的缺陷,取代血源性抗体,因此具有良好的社会效益和经济效益。 我们将针对HBsAg preS2区表位的人源性单链抗体基因转入大肠杆菌中表达,表达量可达菌体总蛋白的30%,并且目的蛋白在胞内形成包涵体。经Ni离子金属螯合亲和层析、凝胶层析两步纯化,重组抗体的纯度达到97%。将纯化后的单链抗体进行了复性。在优化复性方法后,在抗体浓度为0.34mg/mL时,蛋白收率可达50%。而且复性后的抗体具有较好HBsAg结合活性,其亲和常数达到0.23×10~8,同时测定了一株鼠源单克隆抗体的亲和常数,结果表明单链抗体的亲和力为一株鼠源单克隆抗体的十六分之一。竞争ELISA的结果表明,我们的单链抗体可以抑制一株鼠源单克隆抗体与HBsAg的结合,抑制率可达40.3%。并建...
【英文摘要】 Hepatitis B is a world wide infectious disease, but up to now there has no effective methods to cure it, so prophylaxis of hepatitis B virus (HBV) is very important. The IgG anti-HBsAg derived from humam plasma can be used for the impassive immunization of HBV and prevention of HBV vertical transmission from mother to infant. But the IgG derived from human plasma is absent and has risk of transmisssion of infections. Therefore it is difficult to use it widely. Because human anti-HBsAg recombiant antibody ca...
【更新日期】 2005-10-14

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导师:姚汝华    导师单位:食品与生物工程学院生物工程系    学位授予单位:华南理工大学
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