【英文题名】
Cloning and Fusion Expression of Drosophila Andropin Gene in E.Coli
【作者】
刘变芳 ;
【导师】
郭蔼光 ;
【学位授予单位】
西北农林科技大学 ;
【学科专业名称】
生物化学与分子生物学
【学位年度】
2005
【论文级别】
硕士
【网络出版投稿人】
西北农林科技大学
【网络出版投稿时间】
2005-12-22
【关键词】
抗菌肽 ;
融合表达 ;
抗菌活性 ;
【英文关键词】
Antibacterial peptide ;
Fusion expression ;
Antibacterial activity ;
【中文摘要】
基于抗菌肽结构与功能的关系及前人所做的融合基因工作,本研究设计、合成了大小为34个氨基酸的果蝇抗菌肽基因(Andropin)片段,克隆到T-easy vector保存。随后选择E. coli高效融合表达载体pET32a连接目的片段,并转染到大肠杆菌OrigammiB中进行表达。表达的融合蛋白经His-Tag亲和层析纯化和EK酶切后,对其产物进行活性检测。
1.实验中采用化学合成法合成了含有互补区的两个目的片段和两个引物,结合重叠区互补PCR法扩增得到完整的Andropin基因片段,将其克隆到T-easy vector上,测序正确。基因设计时除了加入合适限制性内切酶位点,在目的片段前加入了肠激酶切位点。这将便于载体选用和后续酶切纯化。
2.实验构建了融合表达载体PET32a-Anp,PCR初步检测筛选阳性转化子,进一步测序正确。选用OrigammiB宿主菌进行转染,并从温度、诱导时间设置不同条件,摸索最佳组合,提高表达量。降低培养温度、延长诱导时间提高表达产物的可溶性。试验结果表明转基因大肠杆菌的最佳培养温度37℃,摇床培养3h后加入诱导剂。诱导温度25℃, 1mM IP...
【英文摘要】
Based on former’s research about the relationship between structure and activity of antibacterial peptides, we designed and synthesized the Drosophila antibacterial peptide─Andropin, which has 34 amino acids.The synthesized whole gene was cloned into the T-easy vector. Choosing an efficient expressing vector─PET32a, we cloned the target gene into it. The recombinant plasmid was transferred into an E.coli host OrigammiB. first the expressed recombinant protein was purified by His-tag purification kit, then d...
【更新日期】
2006-02-16
【相同导师文献】
导师：郭蔼光 导师单位：西北农林科技大学 学位授予单位：西北农林科技大学桑叶对糖尿病大鼠治疗效果的研究 [D]. 西北农林科技大学,2012C57BL/6J小鼠肝脏不同细胞类群的分选及肝细胞蛋白质表达谱构建 [D]. 西北农林科技大学,2011巴西固氮螺菌Yu62在小麦中的定殖以及对小麦的促生作用 [D]. 西北农林科技大学,2010农杆菌介导银杏抗菌蛋白基因Gk-2转化黄瓜抗病性研究 [D]. 西北农林科技大学,2010ats1A启动子驱动的兔出血症病毒外壳蛋白VP60基因的植物表达载体构建及百脉根的转化 [D]. 西北农林科技大学,2009拟南芥转录因子GRAS家族SCL15基因对干旱胁迫的响应分析 [D]. 西北农林科技大学,2009糜子中microRNA的生物信息学预测及实验验证 [D]. 西北农林科技大学,2009果蝇抗菌肽基因Andropin在大肠杆菌中的克隆与融合表达 [D]. 西北农林科技大学,2005草莓镶脉病毒（SVBV）CP基因的克隆及草莓遗传转化体系的建立 [D]. 西北农林科技大学,2005RubisCO纯化、大小亚基片段克隆与小麦灌浆期蛋白质周转研究 [D]. 西北农林科技大学,2005
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