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Zmcdc5片段的原核表达和纯化  
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【英文题名】 Expression of Truncated Zmcdc5 in E.coli
【作者】 张京强;
【导师】 王国英;
【学位授予单位】 中国农业大学;
【学科专业名称】 生化与分子生物学
【学位年度】 2004
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 中国农业大学
【网络出版投稿时间】 2004-07-19
【关键词】 CDC5; Myb; 玉米; 原核表达; 蛋白纯化; 剪接因子;
【英文关键词】 CDC5; Myb; maize; prokaryotic expression; protein purification; splicing factor;
【中文摘要】 1976年,Nurse等在筛选裂殖酵母(S.pombe)细胞周期进程突变体的过程中得到了基因cdc5,后来经实验证明CDC5对细胞周期G2期到M期的转换是必需的:cdc5突变后造成细胞无法完成G2/M转换而死亡;过量表达CDC5会缩短G2期,同时缩短整个细胞周期,并导致细胞变小。后来发现,CDC5基因还在转录和前体mRNA的剪接过程中发挥着重要的作用,并且与NIPP1、PRL、IL-2、FGF-2及DLK等因子相互作用。 本实验室根据玉米胚芽和胚根差异表达的研究,克隆得到Zmcdc5基因的cDNA,并通过筛库和反向PCR获得了Zmcdc5基因组全长序列。 本实验是以Zmcdc5的cDNA为模板,使用PCR获得基因片段,再通过酶切连接,将得到的0.8kb的基因片段构建于pET-30a表达载体上,经过诱导表达和纯化,获得Zmcdc5的融合蛋白,其中包括了ZmCDC5 925个氨基酸中647~914共267个氨基酸残基.大小为35.4kDa,并制备得到了抗体。通过Western检测和点杂验证了抗体的正确性和效价,并对玉米不同组织中的...
【英文摘要】 cdc5 gene is necessary for the G2/M transition. Cells with mutations in cdc5 can not finish the G2/M transition, then die; Overexpression of CDC5 can shorten G2, the cell cycle as well. It also makes cells lessening. It was proved that cdc5 gene works in the processes of transcription,cell cycle and splicing of pre-mRNA. And CDCS can transact with other factors, such as NIPP, PRL, IL-2, FGF-2 and DLK. In the past, We cloned the cDNA of Zmcdc5 based on the studies on difference of gene...

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导师:王国英    导师单位:中国农业大学    学位授予单位:中国农业大学
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