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拟南芥原生质体膜外侧CaM结合位点检测及受体学特性研究  
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【英文题名】 Analysis of ~(35)S-CaM Binding to Arabidopsis Protoplasts
【作者】 郭晓强;
【导师】 崔素娟; 孙大业;
【学位授予单位】 河北师范大学;
【学科专业名称】 细胞生物学
【学位年度】 2003
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 河北师范大学
【网络出版投稿时间】 2003-11-14
【关键词】 (35)~S-caM; 拟南芥原生质体; 受体动力学; 化学交联;
【英文关键词】 (35)~S-CaM; Arabidopsis protoplast; receptor kinetics; chemical crosslinking;
【中文摘要】 我室前期研究表明,钙调素普遍存在于植物质外体,并且发挥着广泛的生物学作用。根据我室药理、生理、生化实验结果及植物信号转导研究的最新进展,推测钙调素可能是作为细胞外多肽,通过与细胞膜外侧受体样蛋白结合而启动胞内的信号传导。本文采用放射配基结合分析法来研究CaM和拟南芥原生质体的结合特性,并通过化学交联的方法来寻找膜上的结合蛋白。 首先,用~(35)S标记的氨基酸混合物喂养工程菌成功地制备了~(35)S标记的拟南芥钙调素(~(35)S-CaM),~(35)S-CaM纯度高、放射活度高、Ca~(2+)与EGTA存在时的电泳行为与未标记CaM相同,可作为一种高灵敏性的探针用于进行受体学分析实验;用拟南芥种子诱导愈伤,通过酶解制备了大量原生质体。 随后,对~(35)S-CaM和拟南芥原生质体的结合进行了受体学分析,包括结合、解离、竞争性和饱和分析,结果显示~(35)S-CaM和拟南芥原生质体的结合具有结合快速性、可逆性、竞争特异性和浓度饱和性,从饱和分析可以得出K_d约为9.2nM,每个原生质体表面大约含有25,000个结合位点,并且其...
【英文摘要】 Our previous studies showed existence of apoplast CaM in the plant cell and CaM had many extracellular functions.So it supposed CaM may be one of important extracellular polypeptides and trigger the intracellular signal transduction by binding the receptor.In this study, radiolabelled ligand is used to investigate the binding characteristic of CaM and A. thaliana protoplasts.and chemical crosslinking is employed to explore binding proteins in the membrane. At first, (35)~S-CaM was pro...

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