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荷花液泡膜型Na~+/H~+逆向转运蛋白基因NnNHX1的克隆及转基因烟草耐盐性的初步分析  
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【英文题名】 Cloning of a Vacuolar Na~+/H~+ Antiporter Gene NnNHX1 from Nelumbo Nucifera and Preliminayr Study on Salt Tolerance of Transgenic Tobacco
【作者】 郭会敏;
【导师】 徐迎春; 刘兆磊;
【学位授予单位】 南京农业大学;
【学科专业名称】 园林植物与观赏园艺
【学位年度】 2011
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 南京农业大学
【网络出版投稿时间】 2012-02-23
【关键词】 荷花; 液泡膜型Na~ /H~ 逆向转运蛋白基因; 克隆; 荧光定量PCR; 转基因; 烟草; 耐盐性;
【英文关键词】 Lotus; Vacuolar membrane Na~ /H~ antiporter gene; Cloning; Fuorescence quantitative PCR; Transgenic; Tobacco; Salt tolerance;
【中文摘要】 盐胁迫严重影响植物的生长和发育,而液泡膜型Na+/H+逆向转运蛋白可以将多余的Na+转运并区隔化于液泡中,在植物耐盐性方面起着重要的作用。 本研究以‘冬荷’为材料,通过设计简并引物,利用RT-PCR和RACE等技术克隆到了一个液泡膜型Na+/H+逆向转运蛋白基因,命名为NnNHX1。序列分析显示,该基因全长为2237 bp,5’和3’非编码区分别长426bp和194bp,开放阅读框为1617bp。疏水性和跨膜分析显示NnNHX1蛋白的N-端高度疏水并含有11个跨膜区域,C-端是一个亲水的尾巴。对NnNHX1的氨基酸序列进行比对表明,NnNHX1与葡萄、水稻、拟南芥等的液泡膜型Na+/H+逆向转运蛋白同源性较高,并且都具有高度保守的氨氯吡嗪咪结合位点序列LFFIYLLPPI。系统进化树分析表明NnNHX1与液胞膜型Na+/H+逆向转运蛋白关系较近,而与质膜型Na+/H+逆向转运蛋白关系较远。 构建了NnNHX1基因的植物双元表达载体pCAMBIA1301-220-NnNHX1,采用农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草,经共培养、继代筛选与生根筛选后,共获得14个抗性植株,经PCR检测后,确定其中7株抗...
【英文摘要】 Salt stress seriously affected the growth and development of plant, while the vacuolar membrane Na+/H+ antiporter could transport and compartment the excess Na+ into vacuoles, playing an important role in plants for salt tolerance. The cDNA of NHX1 gene which was then designated as NnNHXl was successfully isolated from 'Donghe'by RT-PCR and RACE cloning method. The full-length cDNA of NnNHX1 was 2237 bp, included a 426 bp 5'UTR, a 194 bp 3'UTR, and a 1617 bp ORF which was predicted to encode a 59.12 kDa...
【更新日期】 2012-03-31

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