应用反向遗传系统实现RNA病毒的拯救,从而可以在DNA水平上对RNA病毒进行遗传操作,为深入研究RNA病毒的分子生物学及病毒与宿主的相互作用提供了强有力的技术工具。对RNA病毒进行遗传拯救或构建感染性克隆己成为分子病毒学实验室进行病毒结构与功能深入研究的必经之路。兔出血症(RHD)是由兔出血症病毒(RHDV)引起的兔的一种急性﹑败血性﹑高度致死性传染病,是危害世界养兔业的严重传染病之一。本研究选择兔出血症病毒JX/97分离株,克隆其全基因组cDNA,在国内首次尝试构建RHDV反向遗传系统,拯救经过分子标记的RHDV。
1.RHDV JX/CHA/97株全长cDNA分子克隆的构建
设计并合成了覆盖JX/CHA/97株基因组的5对引物,从人工感染RHDV致死的兔肝组织中提取病毒总RNA,采用RT-PCR方法分别扩增各基因片段。通过沉默突变引入一分子标记(EcoR V识别位点)以便于将来区分自然毒株和基因工程毒。利用限制性内切酶,分别消化各基因扩增片段和pBluescript II SK(+)(即pSK)载体,构建JX/97株基因组的全长cD...
【英文摘要】
Using reverse genetics systems for RNA virus rescue and manipulating in DNA level is a strong technique to study molecular biology and interactions between RNA virus and host. Genetic rescue or constructed infectious clone of RNA virus become the necessary way to study structure and function of virus in molecular virology laboratory. Rabbit hemorrhagic disease is a kind of acute﹑lethal infectious disease caused by rabbit hemorrhagic disease virus and have a great harm to rabbit production all o...
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