【英文题名】
Establishment of Hybridoma Cell Lines Secreting Monoclonal Antibody Against Ampicilline
【作者】
杜根成 ;
【导师】
王川庆 ;
【学位授予单位】
河南农业大学 ;
【学科专业名称】
预防兽医学
【学位年度】
2005
【论文级别】
硕士
【网络出版投稿人】
河南农业大学
【网络出版投稿时间】
2005-09-09
【关键词】
氨苄青霉素 ;
载体蛋自 ;
戊二醛法 ;
单克隆抗体 ;
杂交瘤 ;
【英文关键词】
ampicilline ;
protein vetor ;
glutaraldehyde reaction ;
monoclonnal antibodies ;
hybridoma ;
【中文摘要】
本试验用将氨苄青霉素(AMPI)半抗原和载体蛋白BSA、HAS、KLH用戊二醛法连接,室温反应4h左右,用pH6.0的PBS 4℃透析48h,计算人工结合抗原浓度和半抗原的结合比,AMPI-BSA、AMPI-HSA、AMPI-KLH结合比分别为118、44、2192,并用SDS-PAGE进行鉴定,结果表明成功将AMPI连接到载体蛋白上,制备了人工结合抗原。用制得的人工结合抗原和等量弗氏佐剂(FA)混合,釆用小剂量,延长免疫时间和免疫间隔的长程免疫法免疫8周龄Balb/c小鼠,免疫间隔1个月左右,免疫5～6次,免疫时间在5～6个月。取免疫Balb/c小鼠的脾细胞和SP_2/O用50%聚乙二醇(PEG 4000)融合细胞,用建立的间接ELISA方法,筛选阳性克隆细胞孔,经过3次有限稀释法克隆和亚克隆,得到2株能够分泌抗AMPI抗体的杂交瘤细胞株,分别命名2D_5、4C_5。经鉴定2D_5、4C_5染色体数目分别为95.6条、96.9条;上清效价分别为:1∶1024、1∶512;腹水的效价分别为:1∶102400、1∶204800,提纯后的腹水的效价分别为:1∶102400、1∶102400;提纯腹水蛋白含量分别为...
【英文摘要】
Ampicilline coupled onto macromolecular protein such as Bovine Serum Albumin(BSA),Human Serum Albumin(HAS), Hemocyanin succinylated from keyhole limpet (KLH),by glutaraldehyde reaction.After a reaction time of 4 h,the ampicilline-protein conjugate was dialysed against repeated changes of 1000 mL PBS (pH 6.0) using magnetic stirrer ,at 4℃ for 48h.The rotio of ampicilline coupled onto protein was determined by UV ,the rotio of ampicilline- BSA, ampicilline- HSA, ampicilline- KLH was 118,44,2192 respectively. ...
【更新日期】
2005-11-15
【相同导师文献】
导师：王川庆 导师单位：河南农业大学 学位授予单位：河南农业大学猪流行性腹泻流行毒株部分基因分子特征及防治措施研究 [D]. 河南农业大学,2013输卵管囊肿鸡群4种病原调查及IBV流行毒株S1基因变异分析 [D]. 河南农业大学,2010河南省猪2型圆环病毒分子流行病学调查 [D]. 河南农业大学,2009IBDV快速诊断试纸在该病病原和抗体快速检测中的应用及鼠抗兔-IgG单克隆抗体的研究 [D]. 河南农业大学,2003两株PRRSV株传代驯化及免疫特性初步评价 [D]. 河南农业大学,2021猪盖他病毒检测方法的建立与应用及病毒的分离鉴定和序列分析 [D]. 河南农业大学,2018猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定、变异与重组及致病性研究 [D]. 河南农业大学,2018猪传染性胃肠炎与猪流行性腹泻二联灭活疫苗的研制及免疫原性评价 [D]. 河南农业大学,2014不同PRRSV毒株的分离鉴定、序列及致病性分析 [D]. 河南农业大学,2017鸭源鸡杆菌外膜蛋白A免疫保护性研究及其缺失突变株的构建 [D]. 河南农业大学,2017
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