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弓形虫核酸疫苗pcDNA_3/GRA_1的研究  
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【作者】 蔡力汀;
【导师】 舒衡平;
【学位授予单位】 中南大学;
【学科专业名称】 病原生物学
【学位年度】 2003
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 中南大学
【网络出版投稿时间】 2003-07-14
【关键词】 弓形虫; 致密颗粒抗原-1; 核酸疫苗; 免疫筛选;
【英文关键词】 Toxoplasma gondii; dense granules antigen-1 (GRA1); DNA vaccine; immunological screening;
【中文摘要】 目的：构建弓形虫致密颗粒抗原-1(GRA1)真核表达质粒，并观察重组质粒DNA接种诱导的保护性免疫应答。 方法：1、用免疫兔血清和2个单克隆抗体筛选弓形虫速殖子cDNA文库，对阳性克隆进行序列分析；2、采用聚合酶链反应(PCR)扩增出编码GRA1目的基因，用EcoRⅠ／XhoⅠ分别对扩增产物和真核表达质粒pcDNA3进行双酶切，将GRA1定向克隆到pcDNA3 EcoRⅠ／XhoⅠ位点；对重组质粒进行PCR扩增、双酶切初步鉴定后作序列测定；3、大量制备并提取重组质粒pcDNA3／GRA1，肌肉注射法免疫小鼠；用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测特异性抗体水平及PCR检测不同组织DNA中GRA1基因；用免疫荧光法(IFA)检测GRA1蛋白在肌肉组织中的表达；用弓形虫RH株速殖子攻击感染免疫鼠，并观察其存活时间。 结果：1、通过筛选弓形虫cDNA文库，共获得12个阳性克隆。经序列测定发现插入片段的大小在450bp-2400bp之间，查询所有基因库并经EPAS(Expert Protein Analysis System)软件分析鉴...
【英文摘要】 Aim: Constructing a recombinant plasmid encoding GRA1 protein of Toxoplasma gondii and observing the protective immunity induced by recombinant plasmid DNA vaccination. Methods: 1. Toxoplasma gondii cDNA library was screened with 2 monoclonal antibodies and sera from rabbits, which were immunized by T.gondii RH strain tachyzoit antigens. The sequences of positive clones were analyzed. 2.The sequence encoding GRA1 was amplified by PCR. The amplified product and eukaryotic expression ve...

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导师：舒衡平    导师单位：中南大学    学位授予单位：中南大学
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