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酵母双杂交系统筛选与Myosin X相互作用的蛋白质  
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【英文题名】 Screening the Interacting Proteins of Myosin X by Yeast Two-hybrid System
【作者】 郭晓旭;
【导师】 王兴智; 朱筱娟;
【学位授予单位】 东北师范大学;
【学科专业名称】 遗传学
【学位年度】 2010
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 东北师范大学
【网络出版投稿时间】 2010-09-21
【关键词】 蛋白质相互作用; 细胞迁移; 细胞周期; 酵母双杂交; Myo; X;
【英文关键词】 protein-protein interaction; cell migration; cell cycle; yeast two-hybrid; Myosin X;
【中文摘要】 酵母双杂交系统是目前研究蛋白质相互作用的重要手段之一,此方法具有高灵敏度、相对简单、快捷及不经蛋白纯化即可获得蛋白编码区的优点。近年来,酵母双杂交技术在研究蛋白质相互作用、筛选新蛋白、研究蛋白功能等方面发挥了重要作用。 肌球蛋白X(Myosin X, Myo X)是仅表达于脊椎动物中的非传统肌球蛋白,其尾部的MyTH4和FERM结构域可与多种功能蛋白相结合。这些蛋白与丝足的形成、神经元的突起生长与投射、内皮细胞的迁移、细胞的粘附及有丝分裂中纺锤体的形成等过程密切相关。因此Myo X在脊椎动物细胞中发挥了重要作用。 为了进一步深入的研究Myo X在脊椎动物体内的作用,本研究利用酵母双杂交技术,以Myo X的尾部结构域中的MyTH4和FERM结构为诱饵,对人胎脑cDNA文库进行了筛选。实验经Leu、Trp、His、Ade四种氨基酸营养缺陷型培养基筛选以及β-半乳糖苷酶活性分析,共获得112个阳性克隆,经过反复传代四种氨基酸营养缺陷型培养基筛选和β-半乳糖苷酶活性分析,去除一个酵母菌株中含有两个cDNA文库质粒的可能,再经过回交实验验证,最大程度的保证了酵母双杂交结果的准确性。...
【英文摘要】 Yeast two-hybrid system is one of the most important methods to study protein-protein interaction. The system is sensitive, simple and rapid, which the sequence of target proteins can be obtained directly. For the last few years, yeast two-hybrid system is used to study protein-protein interaction, screen the novel proteins and study the function of protein. Myosin X is one of the members in unconventional myosin super-family and expresses at low concentrations in most vertebrate, which is rel...
【更新日期】 2010-09-28

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