【英文题名】
Investigation on the Deamidation and Disulfide-Bonds of Pegylated Proteins
【作者】
解茹 ;
【导师】
马润宇 ;
【学位授予单位】
北京化工大学 ;
【学科专业名称】
化学工程与技术
【学位年度】
2010
【论文级别】
硕士
【网络出版投稿人】
北京化工大学
【网络出版投稿时间】
2010-09-07
【基金】
863项目;
【关键词】
聚乙二醇修饰 ;
蛋白质 ;
脱酰胺 ;
二硫键 ;
高效液相色谱质谱联用 ;
【英文关键词】
PEGylation ;
Proteins ;
Deamidation ;
Disulfide-bonds ;
HPLC/MS ;
【中文摘要】
蛋白质药物因其具有高活性、特异性强和生物功能明确等特点使其应用日益广泛,但蛋白质的不稳定性使其在储存或运输过程中常出现脱酰胺降解、二硫键错配以及聚集形成沉淀等现象,造成蛋白质的活性损失甚至产生一定的副作用,降低了其临床使用效果。本论文以重组人血管内皮抑制素和重组人粒细胞集落刺激因子为模型蛋白,利用液相色谱质谱联用技术结合蛋白质酶解技术研究了蛋白质储存过程中发生的脱酰胺过程及二硫键变化,继而对二者进行PEG修饰,重点考察PEG修饰对蛋白质储存过程中脱酰胺与二硫键的影响。
本论文从三个方面对药用蛋白质的储存稳定性开展了研究探索。首先,系统研究了重组人血管内皮抑制素在不同储存条件下天冬酰胺的脱酰胺变化,结果表明该蛋白序列中与Gly相连的Asn127在储存过程发生了脱酰胺反应,实验研究不同条件下Asn127脱酰胺过程的动力学并系统考察了不同pH和温度下脱酰胺过程动力学参数,结果表明在实验选择的条件下脱酰胺过程随pH与温度的升高,反应速率加快。
其次,研究了重组人粒细胞集落刺激因子中的二硫键连接方式及其对蛋白质稳定性的影响,蛋白酶解产物中检测出分子间二硫键Cys18-Cys18及错...
【英文摘要】
Pharmaceutical proteins have appealed wide attentions for their high bioactivity, specificity and explicit functions. However, the structural complex of proteins usually results in instability during transport and/or storage. The instability often causes protein degradation such as deamidation, dissociation of subunits and/or disulfide bond-mediated aggregation, which will decrease the pharmaceutical efficiency of the target proteins. In this work, deamidation and disulfide bond-mediated instability...
【更新日期】
2010-09-28
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