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甘露糖筛选系统在番茄转化中的应用  
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【英文题名】 Mannose Selection System in Tomato Transformation
【作者】 王洪伟;
【导师】 王兴智;
【学位授予单位】 东北师范大学;
【学科专业名称】 遗传学
【学位年度】 2009
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 东北师范大学
【网络出版投稿时间】 2009-09-21
【关键词】 PMI; 酸性成纤维生长因子; 单链抗体; 转基因番茄;
【英文关键词】 PMI; aFGF; scFv; transgenic tomato;
【中文摘要】 在植物转化系统中应用较为广泛的标记基因包括抗生素抗性基因和除草剂抗性基因两大类,常用的抗性基因包括nptⅡ、hpt和bar基因等。但是利用这些标记基因的选择体系都可能存在生物安全性问题,因而培育无标记基因及安全标记基因的转基因植物已成为基因工程的重要目标之一。 甘露糖选择体系是一种正选择体系,磷酸甘露糖异构酶(PMI)是一种安全的标记基因。为了获得对肿瘤治疗具有积极作用的aFGF的单链抗体,本实验以大肠杆菌manA基因作为选择标记基因,利用甘露糖为选择剂来获得能够表达aFGF单链抗体的转基因番茄。我们首先通过七组对照实验确定甘露糖作为选择剂的最佳浓度,然后分别构建了植物表达载体pM390-scFv和pM390-E_8-scFv(E_8启动子为果实特异性启动子),构建的双元表达载体带有一个单链抗体基因,载体上的大肠杆菌manA基因可以表达磷酸甘露糖异构酶,因而在转化过程中可以使用甘露糖作为选择剂。通过实验我们初步建立了PMI/甘露糖正选择体系,切取7～9d苗龄的番茄子叶作为外植体预培养2天,以携带植物表达载体的农杆菌LBA4404侵染外植体5～10 min,培养基中添加2 mg/l玉米...
【英文摘要】 Selection of the transformed plant cells is traditionally accomplished by the introduction of an antibiotic or herbicide resistance gene,enabling transformed cells to survive on a medium containing a selective agents.The nptⅡ,hpt,and bar genes are frequently used to select transformed plant tissues.There are some concerns,however,regarding the safety issues of these markers existed in genetically modified organisms(GMOs).The avoidance of antibiotic or herbicide resistance markers in GMOs has been en...
【更新日期】 2009-10-13

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导师：王兴智    导师单位：东北师范大学    学位授予单位：东北师范大学
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