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人源弹性蛋白酶2B基因的克隆及其原核、真核载体构建和表达  
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【英文题名】 Cloning, Prokaryotic Expression and Construction of Eukaryotic Expression Vetor of Elastase 2B Gene in Human
【作者】 谷新晰;
【导师】 田洪涛; 许文涛;
【学位授予单位】 河北农业大学;
【学科专业名称】 微生物学
【学位年度】 2009
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 河北农业大学
【网络出版投稿时间】 2009-08-20
【关键词】 人弹性蛋白酶2B; 载体构建; 毕赤酵母表达系统; 蛋白表达;
【英文关键词】 Human elastase2B; Vectors construction; Pichia expression system; Protein expression;
【中文摘要】 弹性蛋白酶(elastase)是以水解不溶性弹性硬蛋白为特征的一类广谱蛋白水解酶,在食品、医药、日化及环保领域有重要的开发前景。目前国内弹性蛋白酶的生产方法主要是从动物的胰脏中提取,受到脏器材料及生产工艺的限制,成本较高,产量较低,不能满足市场需求,限制了弹性蛋白酶的应用推广。国内外广泛开展利用微生物发酵生产弹性蛋白酶,在一定程度上缓解了工业用酶,如肉类嫩化剂、化妆品添加剂等方面的需求,但作为医用生化药物仍然有很大的局限。这主要是由于微生物发酵生产的弹性蛋白存在安全性方面的问题,另外不同微生物来源的弹性蛋白酶性质有一定差别,距离医用生化药物商品生产有一定的距离。 鉴于以上的原因,本研究利用基因工程技术,通过反转录克隆了人肾脏组织中的弹性蛋白酶2B(elastase 2B,ELA2B)基因,利用大肠杆菌和毕赤酵母表达系统对其进行表达,为将来大规模生产安全的人源弹性蛋白酶打下基础,同时对人源ELA2B蛋白结构研究和弹性蛋白酶性质研究提供了实验材料。 本试验采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从人体肾脏组织中提取的总RNA中扩增得到了ELA2B基因,构建pGEM-T ...
【英文摘要】 Elastase IS characterized by their ability to hydrolyze elastin which a fibrous insolubleprotein for a class of broad—spectrum proteolytic enzyme.It has important prospects for thedevelopment in food,medicine,daily chemical,and environmental protection.Elastase isusually extracted from the pancreas of animals,which is restricted on raw materials andproduction techniques.As for such pattern,it will cost higher but produce lower,lag farbehind the market demands,and finally will limit the application a...
【更新日期】 2009-09-07

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