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短杆菌胆固醇氧化酶基因的表达研究  
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【英文题名】 Expression of Cholesterol Oxidase Gene from Brevibacterium sp. DGCDC-82
【作者】 张玲;
【导师】 王武;
【学位授予单位】 江南大学;
【学科专业名称】 生物化学与分子生物学
【学位年度】 2008
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 江南大学
【网络出版投稿时间】 2009-02-07
【关键词】 胆固醇氧化酶; Brevibacterium; sp.; DGCDC-82; 信号肽; 表达; E.coli; 巴斯德毕赤酵母;
【英文关键词】 Cholesterol oxidase; Brevibacterium sp. DGCDC-82; signal peptide; expression; E.coli; Pichia pastoris;
【中文摘要】 胆固醇氧化酶(EC1.1.3.6 COD)在食品加工、医疗检测、生物抗虫等方面的作用日益受到人们的重视,并且显示出巨大的应用潜力。本文主要研究短杆菌Brevibacterium sp. DGCDC-82胆固醇氧化酶在大肠杆菌和在巴斯德毕赤酵母中的表达。 用PCR方法从Brevibacterium sp. DGCDC-82染色体DNA中扩增出含信号肽序列的胆固醇氧化酶结构基因,插入大肠杆菌表达载体pET28a(+)中,构建成重组质粒pET28a-COD(s+)。以pET28a-COD(s+)为底物,扩增出不含信号肽的胆固醇氧化酶结构基因,构建成重组质粒pET28a-COD(s-)。两种重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3)均获得活性表达,不含信号肽基因的转化子酶活较高。在转化子中,两种结构基因与pET28a(+)携带的His-tag融合表达,经IPTG诱导后均表达出分子量约为55kD的蛋白质,目的蛋白大都为没有活性的包涵体,占细胞总蛋白的50%以上。 将不含信号肽的胆固醇氧化酶基因克隆至含trp/lac双启动子的表达载体pTrc99a中,并在大肠杆菌JM109中进行了IPTG诱导...
【英文摘要】 The significant functions of cholesterol oxidase (EC 1.1.3.6, COD) in food processing, medical assay and biological pest-resistance were recognized gradually and showed potentially use. This research is mainly focused on expression of Cholesterol oxidase gene from Brevibacterium sp. DGCDC-82 in Escherichia coli and expression of the gene in eukaryotes. The structure gene of Brevibacterium sp. DGCDC-82 Cholesterol oxidase with signal sequence was amplified from genomic DNA of Brevibacterium sp. D...
【更新日期】 2009-02-17

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