【英文题名】
Studies on Fermentative Technology of E.coli Containing Eukaryotic Expression Plasmid with IBV Genes
【作者】
朱麟 ;
【导师】
王红宁 ;
【学位授予单位】
四川农业大学 ;
【学科专业名称】
预防兽医学
【学位年度】
2008
【论文级别】
硕士
【网络出版投稿人】
四川农业大学
【网络出版投稿时间】
2008-12-08
【基金】
“863”;
【关键词】
鸡传染性支气管 ;
大肠杆菌 ;
发酵工艺 ;
质粒DNA ;
提取工艺 ;
【英文关键词】
Infectious bronchitis ;
E.coli ;
fermentation ;
plasmid DNA ;
extracting technology ;
【中文摘要】
本研究以本课题组构建的携带鸡传染性支气管炎病毒S1、M、N基因真核表达质粒(pVAX1-S1、pVAX1-M、pVAX1-N、VR1020-S1、VR1020-M、VR10200N)的大肠杆菌基因工程菌为研究对象,对其发酵工艺进行了研究。
采用单因子分析和正交设计,摇瓶发酵对各重组大肠杆菌的培养基条件进行了研究,确定优化了培养基的成份。发酵后,以优化的碱裂解法提取质粒,产量最高可达27.8mg/L,纯度达到1.88,是未优化前质粒产量的2.62倍。
研究了携带鸡传染性支气管炎病毒真核表达质粒基因工程菌在5L发酵罐中的发酵工艺。优化了上罐发酵接种量、培养温度、初始pH及溶氧等培养条件。确定了优势菌株pVAX1-M,以优化的碱裂解法提取质粒产量可达57mg/L,纯度达到1.88,是未优化前质粒产量的4.3倍。
对发酵液用热激法和碱裂解法两种不同的提取方法进行粗提,对碱裂解法进行优化,对裂解时间和裂解反应液的比例进行研究。再用聚乙二醇和硅藻土两种方法进行纯化,建立了以碱裂解法粗提,硅藻土法纯化的质粒DNA提纯工艺。该工艺可去除大部分RNA、基因组DNA和蛋白质等杂质,提取的...
【英文摘要】
The fermentation parameters of recombinant E.coli which contains the eukaryoticexpression plasmid pVAX1-S1, pVAX1-M, pVAX1-N, VR1020-S1, VR1020-M and VR1020-N were investigated.
By a single factor experiment and orthogonal test, the fermentation parameters of recombinant E.coli which contains the eukaryotic expression plasmid with IBV genes in shake flask were investigated. In the experiment, the optimum medium was carried out and definited the medium ingredient. After fermentating, the optimum ...
【更新日期】
2009-01-12
【相同导师文献】
导师：王红宁 导师单位：四川农业大学 学位授予单位：四川农业大学禽传染性支气管炎病毒H120株全基因组序列测定分析 [D]. 四川农业大学,2010猪源致病性大肠杆菌药敏检测及复方安普霉素、多西环素抗菌制剂研究 [D]. 四川农业大学,2008动物源细菌对四环素类药物耐药基因三重PCR检测试剂盒研制 [D]. 四川农业大学,2008枯草芽孢杆菌WHNB02中性植酸酶基因在巨大芽孢杆菌中表达研究 [D]. 四川农业大学,2008携带IBV基因真核表达质粒的大肠杆菌工程菌发酵工艺研究 [D]. 四川农业大学,2008RNA干扰和合成小分子对大肠杆菌外排泵抑制作用研究 [D]. 四川农业大学,2008鸡白细胞介素6基因的克隆及对新城疫LaSota疫苗的免疫增强作用研究 [D]. 四川农业大学,2008猪口蹄疫亚洲Ⅰ型病毒分离鉴定、VP1基因和疫苗免疫研究 [D]. 四川农业大学,2008细菌氯霉素类药物耐药基因三重PCR检测试剂盒研究与应用 [D]. 四川农业大学,2008猫干扰素FeIFN-ω和FeIFN-α的克隆、表达和体外生物学活性研究 [D]. 四川农业大学,2008
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