【英文题名】
Expression of Neutral Phytase Gene from Bacillus Subtilis WHNB02 in Bacillus Megaterium
【作者】
牟琳 ;
【导师】
王红宁 ;
【学位授予单位】
四川农业大学 ;
【学科专业名称】
生物化学与分子生物学
【学位年度】
2008
【论文级别】
硕士
【网络出版投稿人】
四川农业大学
【网络出版投稿时间】
2008-12-08
【关键词】
巨大芽孢杆菌 ;
中性植酸酶 ;
基因表达 ;
培养条件 ;
补料分批发酵 ;
【英文关键词】
Bacillus Megaterium ;
neutral phytase ;
gene expression ;
cultivation condition ;
Fed-batch fermentation ;
【中文摘要】
本研究从课题组成功克隆的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WHNB02中性植酸酶基因phyC(GenBank No:AF AY220075)出发,从信号肽切割位点序列之后设计上游引物(引入一个SacⅠ酶切位点),在终止密码子处设计下游引物(引入一个BamHⅠ酶切位点),通过PCR去除该酶的信号肽编码序列。PCR扩增得到大小约1.1Kb的单一条带产物,即为目的基因表达片段。该产物经回收纯化后连接到T载体pMD18T上,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,经PCR,酶切,测序鉴定后,获得阳性克隆菌株。提取质粒,进行SacⅠ、BamHⅠ双酶切,与经相同双酶切处理的巨大芽孢杆菌表达载体pHIS1525连接,并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选到阳性菌落后提取质粒,并电击转化巨大芽孢杆菌WH320电击感受态细胞,使之在表达载体自身信号肽的引导下进行分泌表达。在含有10μg/mL的Tet抗性平板上筛选后,经菌落PCR鉴定,获得阳性克隆菌株。通过植酸酶酶活测定表明产物具有植酸酶活性。SDS-PAGE分析表明该酶相对分子量约为55KDa。
初步优化基因工程菌的培养条件,结果表明:最优条件...
【英文摘要】
The neutral phytase gene which come from Bacillus subtilis WHNB02(GenBank Access No. AF220075) is the target gene in this research.In order to remove the signal peptide and insert SacI and BamHI sites at the 5' and 3' ends,designing primers which have the two restriction'enzyme sites after the signal peptide.The single amplified PCR fragment was about 1.1Kb.It's the target expression fragment.The pcr product was ligated with the Tvector pMD18T vector after it has been recycled and pured.Transform the...
【更新日期】
2009-01-05
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