负链RNA病毒反向遗传通用载体的构建与鉴定-中国学术期刊网络出版总库

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负链RNA病毒反向遗传通用载体的构建与鉴定

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【英文篇名】	Construction of universal reverse genetic vector for minus RNA viruses
【下载频次】	★★★★★
【作者】	王革非; 张驰; 曾祥兴; 张衡; 陈幼莹; 李卫中; 李康生;
【英文作者】	WANG Ge-fei; ZHANG Chi; ZENG Xiang-xing; ZHANG Heng; CHEN You-ying; LI Wei-zhong; LI Kang-sheng(Department of Microbiology and Immunology; Key Immunopathology Lab of Guangdong Province; Shantou University Medical College; Shantou 515041; Guangdong; China);
【作者单位】	汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室广东高校免疫病理重点实验室;
【文献出处】	癌变·畸变·突变 , Carcinogenesis,Teratogenesis & Mutagenesis, 编辑部邮箱 2010年 03期期刊荣誉：ASPT来源刊 CJFD收录刊
【中文关键词】	反向遗传; RNA病毒; 载体;
【英文关键词】	reverse genetics; RNA virus; vector;
【摘要】	目的:用于负链RNA病毒的重组技术称为反向遗传技术,其核心需要构建一个具有双向启动子的反向遗传通用载体,可以分别正向转录翻译病毒复制所需酶系和负向转录病毒负链RNA。为此,构建负链RNA病毒反向遗传通用的载体。方法:为提高转染和表达效率,首先改造pcDNA3载体,通过酶切删除pcDNA3载体中非必需序列,在保留Amp抗性的前提下,通过酶切去除pcDNA3载体中非必需的Kan抗性表达盒与CMV启动子前区。利用长引物合成含有反向polI启动子与多克隆位点的基因片段。将合成后的片段酶切、补平粘端、连接,反向插入至经改造后的pcDNA3载体中,构建反向遗传通用表达载体。采用PCR检测、酶切鉴定以及DNA测序进行验证。结果:PCR检测、酶切鉴定以及DNA测序结果表明,载体构建正确,合成及插入序列与预期设计完全一致。结论:成功构建具有CMV与polI双向启动子的反向遗传通用载体,为建立负链RNA病毒反向遗传平台提供了研究基础。
【英文摘要】	OBJECTIVE:To construct a system for reverse genetics of minus RNA viruses,the universal reverse genetic vector was constructed.METHODS:Using pcDNA3 as plasmid backbone,non-essential Kanamycin resistant expression cassettes and CMV promoter upstream region were removed.Then the fragment including reverse pol I promoter and multiple clone site were synthesized by PCR and inserted into the reconstructed pcDNA3.The modified pcDNA3 and universal reverse genetic vector were identified by restriction enzyme.RESULT...
【基金】	国家自然科学基金(30771988,30972766); 广东省自然科学基金(8151503102000022,9451503102003499); 高等学校博士学科点专项科研基金(20094402110004); 广东高校优秀青年创新人才培育项目(LYM08056); 农业微生物学国家重点实验室开放课题(AML200910)
【更新日期】	2010-06-29
【分类号】	Q78
【正文快照】	负链RNA病毒是一类遗传物质为单链3′→5′RNA的病毒,包括正粘病毒科(Orthomyxoviridase)的流感病毒,副粘病毒科(Paramyxoviridae)的呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、人偏肺病毒,出血热病毒的汉坦病毒、埃博拉病毒等,在人类和动物中具有一定的流行性和致病性,是一类重要

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