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人工改造的cry1Ac、cry1Ie基因在大肠杆菌、转基因烟草和玉米中的表达     在线阅读　整本下载　分章下载　分页下载 本系统暂不支持迅雷或FlashGet等下载工具
【英文题名】 Expression of the Modified cry1Ac、crylIe Genes in E.coli, Transgenic Tobacco Plants and Transgenic Maize Plants
【作者】 刘允军;
【导师】 王国英;
【学位授予单位】 中国农业大学;
【学科专业名称】 遗传学
【学位年度】 2004
【论文级别】 博士
【网络出版投稿人】 中国农业大学
【网络出版投稿时间】 2004-07-19
【关键词】 cry1Ie; cry1Ac; 大肠杆菌; 烟草; 信号肽; 玉米;
【英文关键词】 cry1Ie; cry1Ac; E. coli; tobacco; signal peptide; maize;
【中文摘要】 本研究根据植物所偏爱密码子原则，改造苏云金芽孢杆菌crylAc，crylIe野生型基因的编码区序列，人工合成crylAc，crylIe基因。将这两个基因构建到原核表达载体pET28b中，构建成原核表达载体pETAc和pETIe。将两个原核表达载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中，并进行了诱导表达。诱导表达出两个目的蛋白并进行了纯化。纯化的目的蛋白免疫兔子，制备了这两种蛋白的多克隆抗体。纯化这两种蛋白的包涵体，用玉米螟进行虫试。虫试结果显示原核表达的两种包涵体蛋白对玉米螟有较好的杀虫活性。 进一步将crylAc，crylIe基因构建到真核表达载体p3301中，构建植物表达载体p3301ubiAc和p3301ubiIe。在这两个表达载体中，两个基因分别受ubiquitin启动子的调控。两个载体转化烟草并得到了转基因烟草，PCR、Southern杂交结果显示，crylAc，crylIe基因整合到转基因烟草的基因组中。用转基因烟草叶片进行虫试，结果显示转基因烟草能有效杀死玉米螟幼虫。 运用PCR技术克隆了马铃薯蛋白酶抑制剂基因Ⅱ的信号肽序列...
【英文摘要】 The coding regions of wild Bacillus thuringiensis cry1Ie and cry1Ac gene were modified according to plant preferring codons. The modified crylle and crylAc gene were artificially synthesized. Modified crylle and crylAc gene were cloned into prokaryotic expression vector pET28b, to construct plasmid pETIe and pETAc. These two proteins' expression in E. coli BL21(DE3) were confirmed by SDS-PAGE analysis. Proteins purified were injected into rabbit to prepare polyclonal antibodies. Bioassays using c...

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