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结核分枝杆菌ESAT-6基因体外扩增、克隆及在耻垢分枝杆菌中的表达  
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【英文篇名】 In vitro amplification,cloning of Mycobaterium tuberculosis ESAT-6 gene and its expresson in Mycobacterium smegmatis mc~2 155
【下载频次】 ★★★★☆
【作者】 付小强; 吴少庭; 黄汉菊; 甘燕; 李晓恒;
【英文作者】 FU Xiao-qiang; WU Shao-ting; HUANG Han-ju; GAN Yan; LI Xiao-heng(Shenzhen Center for Disease Control and Prevention; Shenzhen 518020; China);
【作者单位】 华中科技大学同济医学院; 深圳市疾病预防控制中心; 华中科技大学同济医学院 武汉;
【文献出处】 中国人兽共患病学报 , Chinese Journal of Zoonoses, 编辑部邮箱 2007年 08期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  中国期刊方阵  CJFD收录刊
【中文关键词】 结核杆菌; ESAT-6; 耻垢分枝杆菌; 重组BCG;
【英文关键词】 Mycobaterium tuberculosis; ESAT-6; Mycobacterium smegmatis mc2 155; Recombinant BCG;
【摘要】 目的体外扩增结核杆菌ESAT-6基因,并构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒ps3000-ESAT-6和重组耻垢分枝杆菌。方法采用聚合酶链式反应(PCR)方法,体外扩增结核杆菌ESAT-6基因,克隆入pGEMT载体。然后,构建亚克隆ps3000-ESAT-6大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒,经电转化方法,将ESAT-6基因的穿梭质粒转化到耻垢分枝杆菌(Mycobacteri-umsmegmatis mc~2155)中,热诱导此重组耻垢分枝杆菌,用SDS-PAGE电泳观察ESAT-6蛋白的表达,Western blotting鉴定其生物学活性。结果成功扩增了结核杆菌ESAT-6基因;正确构建穿梭质粒ps3000-ESAT-6,用pET表达系统ESAT-6纯化蛋白免疫小鼠的多抗血清通过Western blot证实了该重组耻垢杆菌中有表达并具有生物学活性。结论ESAT-6重组耻垢分枝杆菌构建成功,为下一步表达ESAT-6蛋白的重组BCG(BacilliCalmette-Guérin)疫苗的研究奠定了基础。
【英文摘要】 To amplify ESAT-6 gene of Mycobaterium tuberculosis and construct E.coli-Mycobacterium shuttle plasmid ps3000-ESAT-6 and recombinant M.smegmatis mc2 155. The ESAT-6 gene was amplified from the genomic DNA by polymerase chain reaction in vitro. And the cloning vector pGEMT-ESAT-6 and shuttle vector ps3000-ESAT-6 which was transformed into M.smegmatis mc2 155 by electroporation. The recombinant M.smegmatis mc2 155 was induced by heating, and then the expression and activity of the target protein were determin...
【更新日期】 2007-09-12
【分类号】 R378
【正文快照】 结核病(Tb)是一种流行广、危害大的传染病。目前,全世界近1/3的人感染MTB,而且每年约有900万新发临床结核病例及300多万死亡病例。由于结核杆菌耐药株的出现以及HIV所致AIDS的流行,使TB发病率和死亡率明显上升,BCG这一传统疫苗的效果受到了严峻的挑战。因此,为防止TB耗去了大量

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