兔抗人细胞色素P4504A11合成肽抗体的制备与鉴定

【摘要】 目的制备兔抗人细胞色素P4504A11(CYP4A11)抗体,并对其特性进行初步鉴定。方法利用生物信息学方法分析CYP4A11蛋白的序列,根据亲水性结构、柔韧区、抗原指数及表面概率结构等指标选择多肽序列、合成CYP4A11多肽,与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联,免疫大耳白兔制备抗CYP4A11抗体。辛酸-硫酸铵法纯化抗体,对纯化的抗体进行ELISA、Westernblot、免疫组化等鉴定。结果获得抗CYP4A11合成肽的抗体。该抗体效价为1∶32000。可与CYP4A11合成肽及天然CYP4A11出现特异性反应,该抗体识别的相应抗原的相对分子质量(Mr)为53000,可识别正常肝脏的CYP4A11。结论合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗体。制备的兔抗CYP4A11合成肽抗体可应用于ELISA、Westernblot、免疫组化等实验。更多还原