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两步串联层析法纯化鼠抗人CD28单克隆抗体2F5
【摘要】 目的建立从小鼠腹水中纯化鼠抗人CD28单克隆抗体(mAb)2F5的两步串联层析法。方法将含mAb2F5的腹水经离心、过滤及缓冲溶液变换预处理后,先经固相化金属螯合亲和层析法(immobilizedmetalaffinitychromatography,IMAC)纯化,去除大部分杂蛋白,再经凝胶过滤层析法(gelfiltration,GF)精细纯化,并探讨了上样的流速和洗脱液的种类对mAb2F5纯度的影响。纯化的mAb2F5的生物学活性用3H-TdR掺入法进行分析。结果以两步串联层析法纯化的鼠抗人CD28mAb2F5的纯度大于90%,总回收率达70%。纯化的mAb2F5在体外对PBTC具有明显的促增殖作用;而且其促增殖作用的活性优于ProteinG亲和层析法(affinitychro-matography,AC)纯化所获得mAb。结论建立的两步串联层析纯化方法操作简便,所得mAb的纯度高、生物学活性好。
【关键词】 固相化金属螯合层析法；
凝胶过滤层析法；
纯化；
单克隆抗体；
【基金】 国家自然科学基金重点项目(30330540);江苏省干细胞重点实验室基金资助项目(2003年)
- 【文献出处】 细胞与分子免疫学杂志 ,Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology , 编辑部邮箱 ,2007年02期
- 【分类号】R392.11
- 【被引频次】12
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