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重组自噬标志分子LC3的抗血清制备
Prokaryotic Expression of Recombinant LC3,a Molecular Marker of Autophagy,and Development of Its Antiserum
【摘要】 自噬(autophagy)是胞内蛋白等大分子或细胞器直接或间接与溶酶体结合,从而得以降解的过程.微管相关蛋白1轻链3-β(microtubule-associated protein1light chain3-β,MAP1LC3-Ⅱ,简称LC3),是在高等真核细胞中发现的第一种自噬体膜蛋白,可以作为自噬的标志性分子用于检测自噬活动.为深入研究自噬的发生过程及其与健康和疾病的关系,通过构建pET28a(+)-LC3原核表达系统,应用多聚组氨酸结合树脂分离和纯化了重组LC3蛋白,以该蛋白为免疫原制备了抗LC3的抗血清,并利用HeLa细胞自噬模型采用Western印迹方法对该抗血清的特性进行了鉴定.结果显示,兔抗LC3抗血清同时可以识别LC3的2个亚型LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ,且可清晰检测到自噬发生时LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化,表明该血清可以用于自噬的检测.
【关键词】 自噬；
微管相关蛋白1轻链3；
抗血清；
【基金】 国家自然科学基金(No.30371306);新世纪优秀人才支持计划(No.NCET-04-0033)资助~~
- 【文献出处】 中国生物化学与分子生物学报 ,Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology , 编辑部邮箱 ,2007年06期
- 【分类号】R392
- 【被引频次】6
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