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小反刍兽疫病毒H糖蛋白基因原核表达载体的构建及表达

Construction of prokaryotic vector and expression of H glycoprotein gene of peste des petits ruminants virus

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【作者】 刘玉洪花群义徐自忠杨云庆周晓黎董俊尹尚莲许靖逸高洪

【Author】 LIU Yu-hong~(1),HUA Qun-yi~(2),XU Zi-zhong~(2),YANG Yun-qing~(2),ZHOU Xiao-li~(2),DONG-Jun~(2),YIN Shang-lian~(2),XU Jing-yi~(1),GAO Hong~(1)(1.Yunnan Agricultural University,Kunming 650201,China;2.Center of Technology,Yunnan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Kunming 650228,China)

【机构】 云南农业大学云南出入境检验检疫局技术中心云南农业大学 云南昆明650201云南昆明650228云南昆明650201

【摘要】 参照GenBank中小反刍兽疫病毒(PPRV)H抗原基因序列,人工合成了PPRV H基因,将其克隆至pUC18-T质粒中,转化E.coliJM109感受态细胞,构建并选择PPRV H基因克隆重组质粒,经核苷酸序列分析正确,将其克隆至pBAD/Thio-TOPO载体中,转化E.coliTOP10感受态细胞,核苷酸序列分析证实,成功构建了PPRV H基因重组表达载体。经不同浓度L-阿拉伯糖诱导,可稳定、高效地表达PPRV H抗原。SDS-PAGE分析结果表明,用终浓度为0.2 g/L的L-阿拉伯糖诱导5 h的表达量最高,表达蛋白为分子质量约83 ku的融合蛋白;经薄层扫描分析,其表达产量约占菌体总蛋白的10%。Western-blotting检测表明,诱导的蛋白能与PPRV H蛋白单抗发生特异性反应,说明表达的融合蛋白中含有PPRV H糖蛋白抗原。

【Abstract】 The H glycoprotein gene of peste des petits ruminants virus(PPRV),which was synthesized artificially according to the Indian vaccine,was sub-cloned from pUC18-H,and inserted into pBAD/Thio-TOPO vector.The recombinant plasmid was identified by PCR.Sequence analysis confirmed that the H glycoprotein gene was inserted correctly.SDS-PAGE analysis revealed that the H protein gene was expressed at high level in Escherichia coli TOP10.The expressed fusion protein,which made up 10% of total bacteria protein after being induced with 0.2g/L of L-arabinose for 5 hours,was approximately 83ku in molecular weight.In Western-blotting test,the protein can specifically react with the PPRV H monoclonal antibody,indicating that prokaryotic expression of PPRV H gene can produce H glycoprotein.

【基金】 国家“十五”重大科技攻关项目(2001BA804A48)
  • 【文献出处】 中国兽医科学 ,Veterinary Science in China , 编辑部邮箱 ,2006年09期
  • 【分类号】S852.65
  • 【被引频次】21
  • 【下载频次】227
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