【摘要】 以萝卜为材料,对基因组DNA的RAMP分析体系中的Mg2+、dNTPs和引物浓度进行优化。分别设计3个浓度梯度:Mg2+为0.75、1.5、3.0 mmol.L-1;dNTPs为0.05、0.15、0.3mmol.L-1;引物为0.065、0.2、0.4μmol.L-1,并对合适退火温度进行研究。筛选出的RAMP优化体系为(20μL):dNTPs 0.15 mmol.L-1,Mg2+1.5 mmol.L-1,引物0.2~0.4μmol.L-1,DNA10 ng,Taq E 0.8U;PCR扩增程序为94℃3 m in,94℃1 m in,45℃1 m in,72℃1.5 m in,42个循环,72℃8 m in。运用此体系,进行引物组合筛选,并对7个萝卜品种的遗传多样性与品种鉴定进行RAMP标记分析。更多还原

【Abstract】 Genomic DNA of Radish was analyzed by optimizing the concentration of Mg²⁺,dNTPs and primer in Random Amplified Microsatellite Polymorphism（RAMP） system.Three different concentration gradients were set respectively,Mg²⁺（0.75）,（1.5）,（3.0） mmol·L^-1;dNTPs（0.05）,（0.15）,（0.3）(mmol·L^-1);primer（0.065）,（0.2）,（0.4） μmol·L^-1,and the suitable annealing temperature was also screened.An optimization of RAMP reaction system for radish genomic DNA is（20 μL）: dNTPs （0.15） mmol·L^-1,Mg²⁺（1.5） mmol·L^-1,primer（0.2）～（0.4） μmol·L^-1,DNA（10 ng）,Taq E（0.8U）.The amplification protocol was: 94℃（3 min）,42 cycles for（1 min） at 94℃,（1 min） at 45℃,（1.5 min） at 72℃,followed by a final extension of（8 min） at 72℃.The suitable system was applied in screening the primer combinations,and the genetic diversity of seven radish varieties was analyzed in RAMP marker system.更多还原