【摘要】 以雄性不育和可育万寿菊及其子代为材料,在PE-2400型PCR仪上进行扩增,通过3次正交试验设计,优化得到了最佳的RAPD反应体系,确定了各个因素的最佳水平。在20 μL反应体系中,最佳的浓度配比为:10×Buffer中含10．00 mmol·L-1Tris-HCl、50．00 mmol·L-KCl、0．001％gelatin、dNTP0．25 mmol· L-1、TaqDNA聚合酶1．5 U、MgCl2 1．25 mmol·L-1、DNA20-60 ng、引物0．60 pmol·μL-1,预变性时间5 min, 退火温度37℃较好,1 min的延伸时间也满足了2 kb以下的DNA片段合成,循环35次能得到较好的 RAPD图谱。更多还原

【Abstract】 Using marigold male sterile line, fertile line and F1 as experimental materials, this paper presents best established RAPD reaction conditions by orthogonal design of three times. A stable RAPD reaction system for marigold was set up. This system was in the volume of 20μL containing 10.00mmol·L-1 Tris - HCl, 50.00mmol·L-1 KCl, 0. 001% gelatin, dNTP0.25mmol·L-1, TaqDNA polymerase1.5 Unit , MgCl21 .25mmol·L-1, DNA20-60ng, Primer 0.6pmol·μL-1 . The condition of pre - denaturing at 94℃ for 5 min, annealing at 37 ℃ for 30s, extension at 72℃ for 1 min, amplifying for 35 cycles appeared a good result.更多还原