mRNA差异显示技术及其在兽医科学领域的应用

【摘要】 传统mRNA差异显示技术针对真核细胞mRNA3′端poly(A)尾设计12种两个锚定碱基的Oligo(dT)引物(第1位碱基不为A),将不同的mRNA反转录成cDNA;同时在5′端设计20种10bp随机引物,这样构成的引物对可扩增出大体涵盖一定发育阶段某种细胞类型中所表达的全部mRNA,经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,对比挑选差异表达片段。该技术具有简便、快速、RNA用量少、可同时比较多个样品、灵敏度高等优点,其主要不足是假阳性率较高。经不断优化反应条件,显著降低了假阳性的出现。目前该方法广泛应用于医学、动植物分子生物学等研究领域,用以检测差异表达基因和分离新基因、新特异性序列标签,研究动植物发育,检测遗传变异等。更多还原