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双标记选择载体转染牛胎儿成纤维细胞方法的建立
【摘要】 以经SspI和BamHI对所构建的双标记选择载体质粒pCE-EGFP-IRES-Neo-dNdB双酶切后的线性目的DNA为外源基因,对电击介导的牛胎儿成纤维细胞基因转染方法的效率进行了优化。实验结果表明,当电场强度为1.2kV/cm、脉冲时间为1ms时可获得约50个阳性细胞克隆/10~5个细胞的最佳转染效率,通过牛胎儿成纤维细胞对不同浓度G418抗性的敏感性实验确定800μg/mL G418为快速筛选浓度,以300μg/mL G418为维持筛选浓度,从两个牛胎儿成纤维细胞系中共分离了56个绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞克隆,从中选取2个冷冻保存,经PCR检测,证实2个冷冻克隆株均含有所转染的外源基因。
【基金】 北京市重大科技合同项目(990411-01);国家重点基础研究发展规划项目(G20000161)资助
- 【文献出处】 自然科学进展 , 编辑部邮箱 ,2002年12期
- 【分类号】Q78
- 【被引频次】3
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