节点文献

环氧化酶Ⅱ基因克隆及表达

Cloning and Expression of Cyclooxygenase Ⅱ

  • 推荐 CAJ下载
  • PDF下载
  • 不支持迅雷等下载工具,请取消加速工具后下载。

【作者】 汪志军张娟谢晨王旻张玉彬周建伟李爱萍张奕华

【Author】 WANG Zhi-jun, ZHOU Jian-wei, ZHANG Juan, LI Ai-ping, XIE Chen, WANG Min, ZHANG Yi-hua, ZHANG Yu-bin(The Department of Molecular Biology, China Pharmaceutical University, Nan-jing2W009 ;The Laboratory of Toxicology, Nanjing Medical University, Nanjing 210029;The Center of Drug Discovery, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009)

【机构】 中国药科大学分子生物学实验室南京医科大学应用毒理学实验室中国药科大学新药研究中心 南京 210009南京 210009南京 210029南京 210009

【摘要】 利用RT-PCR技术从NIH 3T3细胞中克隆出环氧化酶ⅡcDNA,全长1815bp,测序分析表明与文献报道已知相符,构建真核表达载体。用阳离子脂质体介导转染的方法转染至宿主细胞HEK293细胞中,G418筛选出稳定转染的细胞克隆。加入底物花生四烯酸,通过测定PGE2含量的变化判断酶活,结果表明重组质粒能够表达环氧化酶。

【Abstract】 To obtain the full-length cDNA clone for cyclooxygenase II, we applied RT-PCR to amplify the cDNA from the NIH 3T3 cells. The resulting ISOObp fragment was cloned into the plasmid vector pcDNA 3.1 ( + ) and sequenced. The sequence was identical with the Gene Bank. The transfection of target DNA into HEK 293 cells was performed with the protocol using lipofectin reagent. We used the G418 to screen the stable cell lines, then assayed the content of PGE2 to identify the enzyme activity.

【关键词】 环氧化酶ⅡRT-PCR转染PGE2
【Key words】 Cyclooxygenase IIRT-PCRTransfectionPGE2
【基金】 南京医科大学应用毒理学重点实验室开放基金(K2034);江苏省自然科学基金(BK99099)
  • 【文献出处】 药物生物技术 ,Pharmaceutical Biotechnology , 编辑部邮箱 ,2002年03期
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】93
节点文献中: 

本文链接的文献网络图示:

本文的引文网络