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层理鞭枝藻藻红蓝蛋白操纵子F基因的克隆和表达

CLONING AND OVEREXPRESSING OF PHYCOERYTHROCYANIN OPERON F-GENE OF MASTIGOCLADUS LAMINOSUS IN ESCHERICHIA COLI

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【作者】 郑敏答亮邓明刚秦艺旻周明赵开弘

【Author】 ZHENG Min 1,DA Liang 1,DENG Ming gang 1, QING Yi min 1, ZHOU Ming 2 and ZHAO Kai hong 2 (College of Life Sciences, Wuhan University, Wuhan 430072;College of Life Science and Technology, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 4

【机构】 武汉大学生命科学学院华中科技大学生命科学与技术学院华中科技大学生命科学与技术学院 武汉430072武汉430072武汉430074武汉430074

【摘要】 以层理鞭枝藻总 DNA为模板 ,用 PCR技术扩增得到藻红蓝蛋白操纵子 F基因(pec F) ,然后克隆于质粒 p Bluescript sk(+)。将 pec F基因亚克隆于表达载体 p GEMD,所形成重组质粒 p GEMD- pec F在 E.coli BL2 1 (DE3 )中获得 1 0 %外源表达蛋白并形成包涵体。这个表达产物的分子量为 2 2 .5 k Da,与按 DNA序列预测的蛋白分子量一致。经藻红蓝蛋白α-亚基的重组实验证明 ,该 pec F基因编码的表达产物 Pec F与藻红蓝蛋白操纵子 E基因(pec E)的表达产物 Pec E共同存在时 ,具有藻红蓝蛋白裂合酶活性。

【Abstract】 By PCR method, apo phycoerythrocyanin operon F gene ( pecF ) of Mastigocladus laninosus was amplified from its genomic DNA,and then cloned in pBluescript The pecF gene was subcloned into the expression vector pGEMD,and then transformed into E coli BL21(DE3) After induction, a new protein of molecular weight 22 5kDa existing in inclusion body was overexpressed The expression product was confirmed to possess phycoerythrocyanin lyase activity

【基金】 国家自然科学基金 (编号 :39770 1 75 )资助项目 ;武汉市晨光计划 (编号 :96 5 0 0 1 0 37-2 1 )
  • 【文献出处】 水生生物学报 ,Acta Hydrobiologica Sinica , 编辑部邮箱 ,2002年02期
  • 【分类号】Q943.2
  • 【被引频次】8
  • 【下载频次】73
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