受NaCl诱导的盐藻果糖-1,6-二磷酸醛缩酶cDNA的克隆及其在烟草中的表达

【摘要】 采用快速扩增 cDNA末端（RACE）技术,获得了盐藻（Dunaliella salina）受诱导表达的果糖-1,6-二磷酸醛缩酶全长CDNA（DsALDP）.蛋白质序列分析发现,DSALDP与许多植物叶绿体的果糖-1,6-二磷酸醛缩酶（AldP）具有较高的同源性（66％～73％）.系统进化分析进一步证明DsALDP与藻类的AldP亲缘关系最近.就表达谱而言,DsALDP是NaCl诱导下新表达的转录本,其表达水平随诱导时间的不同而呈显著变化.筛选的DsALDP cDNA构建到双元载体pBI121并导入农杆菌用以转化烟草,对4个T1代转基因植株进行Southern检测,证明DsALDP已整合入转基因植株的基因组.RT-PCR分析显示DsALDP在这些植株中均得到有效表达.生物测试表明,T1-1,T1-2和T1-3植株在100～200 mmol/L NaCl下仍保持醛缩酶活性,且其脯氨酸含量均有不同程度的升高.更多还原