节点文献
人WAF1基因的克隆及其生物调控作用
Cloning and biological regulating effects of human WAF1 gene
【摘要】 目的 克隆人WAF1基因 ,构建成WAF1 pcDNA3真核表达质粒 ,探索WAF1基因的生物调控功能。方法 采用PT PCR和DNA直接测序方法从Hela细胞中扩增人WAF1基因 ,通过克隆到 pcDNA3真核克隆载体上 ,用脂质体法转染Hct 8细胞 ;经免疫荧光和免疫组化方法鉴定WAF1外源基因的表达活性和对Rb基因、cyclinD1基因的调控作用。结果 从Hela细胞扩增的人WAF1基因克隆至真核克隆表达载体 pcDNA3中 ,获得了人WAF1 pcDNA3重组质粒和高效表达P2 1WAF1/CIP1的Hct 8细胞株 ;证实了WAF1具有促进Rb、抑制cyclinD1蛋白表达的调控作用。结论 成功地构建了人WAF1表达质粒WAF1 pcDNA3,外源基因WAF1的表达对下游基因具有生物调控效应
【Abstract】 Objective ToclonehumanWAF1geneandconstructWAF1 pcDNA3recombinantplas mid ,andtoexplorethebiologicalregulatingeffectsofWAF1gene.Methods HumanWAF1genewasam plifiedandclonedintopcDNA3vectorbyRT PCRandDNAdirectsequencingfromHelacells.Byim munofluorescenceandimmunohistochemistrystaining ,toidentifytheexpressionoftheinsertedWAF1gene anditsbiologicalregulatingeffectsonRb ,cyclinD1gene.Results HumanWAF1 pcDNA3recombinant plasmidwascorrectlyconstructedandtransfectedintoHct 8cells.P2 1WAF1/Cip1wassuccessfullyex pressed .ThefunctionalcharacterizationoftheinsertingWAF1geneimpliedthatP2 1WAF1/Cip1expression couldupregulateRbgeneanddownregulatecyclinD1geneatproteinlevel.Conclusion HumanWAF1 pcDNA3canmodulatetheproteinexpressionofthedownstreamgene .
【Key words】 Gene,WAF1; Gene cloning; Direct sequencing; Regulating effect;
- 【文献出处】 中华血液学杂志 ,Chinese Journal of Hematology , 编辑部邮箱 ,2001年10期
- 【分类号】R346
- 【被引频次】2
- 【下载频次】30