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人WAF1基因的克隆及其生物调控作用

Cloning and biological regulating effects of human WAF1 gene

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【作者】 侯治富卜丽莎王华郑德明吴晓冬王维忠王丽颖

【Author】 HOUZhifu ,BULisha ,WANGHua , etal. TheThirdClinicalCollegeandSchoolofBasicMedicalSciences,NormanBethuneUniversityof MedicalSciences,Changchun 130 0 31,China

【机构】 白求恩医科大学第三临床学院白求恩医科大学基础医学院白求恩医科大学基础医学院 130031长春130031长?

【摘要】 目的 克隆人WAF1基因 ,构建成WAF1 pcDNA3真核表达质粒 ,探索WAF1基因的生物调控功能。方法 采用PT PCR和DNA直接测序方法从Hela细胞中扩增人WAF1基因 ,通过克隆到 pcDNA3真核克隆载体上 ,用脂质体法转染Hct 8细胞 ;经免疫荧光和免疫组化方法鉴定WAF1外源基因的表达活性和对Rb基因、cyclinD1基因的调控作用。结果 从Hela细胞扩增的人WAF1基因克隆至真核克隆表达载体 pcDNA3中 ,获得了人WAF1 pcDNA3重组质粒和高效表达P2 1WAF1/CIP1的Hct 8细胞株 ;证实了WAF1具有促进Rb、抑制cyclinD1蛋白表达的调控作用。结论 成功地构建了人WAF1表达质粒WAF1 pcDNA3,外源基因WAF1的表达对下游基因具有生物调控效应

【Abstract】 Objective ToclonehumanWAF1geneandconstructWAF1 pcDNA3recombinantplas mid ,andtoexplorethebiologicalregulatingeffectsofWAF1gene.Methods HumanWAF1genewasam plifiedandclonedintopcDNA3vectorbyRT PCRandDNAdirectsequencingfromHelacells.Byim munofluorescenceandimmunohistochemistrystaining ,toidentifytheexpressionoftheinsertedWAF1gene anditsbiologicalregulatingeffectsonRb ,cyclinD1gene.Results HumanWAF1 pcDNA3recombinant plasmidwascorrectlyconstructedandtransfectedintoHct 8cells.P2 1WAF1/Cip1wassuccessfullyex pressed .ThefunctionalcharacterizationoftheinsertingWAF1geneimpliedthatP2 1WAF1/Cip1expression couldupregulateRbgeneanddownregulatecyclinD1geneatproteinlevel.Conclusion HumanWAF1 pcDNA3canmodulatetheproteinexpressionofthedownstreamgene .

【基金】 吉林省科技发展计划项目 (970 5 67 1)
  • 【文献出处】 中华血液学杂志 ,Chinese Journal of Hematology , 编辑部邮箱 ,2001年10期
  • 【分类号】R346
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】30
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