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应用Southern印迹杂交法检测转移基因在宿主细胞中的整合  
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【英文篇名】 Using Southern Blot Analysis to Determine the Integration of Transduced Genes in the Genomic DNA of Host Cells
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【作者】 阳小卫; 王玮; 夏学鸣; 陈子兴;
【英文作者】 YANG Xiao-wei; WANG Wei; XIA Xue-ming; et al (Jiangsu Institute of Hematology; the First Hospital Affiliated to Suzhou University; Suzhou 215006; China);
【作者单位】 苏州大学附属第一医院;
【文献出处】 苏州医学院学报 , Acta Academiae Medicinae Suzhou, 编辑部邮箱 2001年 02期  
期刊荣誉：CJFD收录刊
【中文关键词】 Southern印迹杂交; 聚合酶链反应; 基因; 基因组;
【英文关键词】 Southern blot; polymerase chain reaction(PCR); gene; genome;
【摘要】 目的　应用Southern印迹杂交法 (Southernblot)证实转移基因整合至宿主细胞基因组DNA。方法　酚氯仿法提取基因转导的PA317/AIM及K5 6 2 /AIM细胞基因组DNA ,以聚合酶链反应 (PCR)扩增转移基因片段 ;随机引物法标记3 2 P -DNA探针 ,与经BamHI酶切、琼脂糖凝胶电泳、转移至尼龙膜的基因组DNA进行Southern杂交反应 ,检测转移基因的整合。结果　PCR反应和Southernblot分析证实转移基因存在于受体细胞基因组DNA中。结论　Southern印迹杂交法证实转移基因稳定整合至逆转录病毒生产细胞PA317/AIM及靶细胞K5 6 2 /AIM中。
【英文摘要】 Objective To confirm the integration of transduced genes in the genomic DNA of host cells by Southern blot analysis. Methods The genomic DNA of transduced PA317/AIM and K562/AIM cells were extracted by phenol-chloroform method. The sequences of foreign genes were detected by polymerase chain reaction (PCR). The BamHI-digested DNA resolved by electrophoresis gel was transferred to nylon member and hybridized with the random primer labeled 32 P-DNA probe. The integration of transduced genes is thus d...
【基金】 国家自然科学基金资助项目!( 3 9770 3 3 1)
【分类号】 R346
【正文快照】 研究表明将耐药基因导入小鼠骨髓细胞 ,能使之获得对化疗药物的抵抗 ,骨髓造血和免疫功能得到一定程度的保护。我们利用含双顺反子的逆转录病毒载体将醛脱氢酶基因和多药耐药基因导入细胞 ,并在体外获得有效表达。为了证实转移基因稳定整合于宿主细胞中 ,我们应用聚合酶链反应(

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