在癌基因研究中应用巢式RT-PCR

【摘要】 目的　讨论癌基因研究中应用巢式反转录聚合酶链反应 (巢式RT PCR)对目的基因进行扩增的应用体会。方法　以巢式RT PCR法检测 5 5例大肠癌患者门静脉血和 5 4例卵巢癌患者及 10例妇科良性肿瘤病人骨髓中细胞角化蛋白基因 19(CK 19)mRNA的表达 ,并对实验方法进行了改良和优化。结果　大肠癌中有 5 4.5 % (30 /5 5 )检得CK 19阳性 ,卵巢癌中有6 3 .0 % (34/5 4)检得CK 19阳性 ,10例妇科良性肿瘤无CK 19的表达。我们认为 ,为了能够在实验中得到好的扩增效果 ,整个RT -PCR操作中应把握以下几点 :①要对用商品化试剂盒抽提到的总RNA样品在冷环境下重新沉淀、纯化 ;②在对反转录反应的温度控制方面 ,要注意高低温转换迅速彻底这一原则 ;③巢式引物的应用 ,能够使整个实验的特异性大为增高。结论　经过上述三方面措施改良后的巢式RT -PCR能够用来检测恶性肿瘤患者CK - 19mRNA的表达 ,因而成为监测这类肿瘤患者造血及血液循环系中癌细胞分布情况的一种有效的分子生物学手段。更多还原